Zeitschrift für Stammzellforschung und -therapie

Abstrakt

Transaktivierung der Zielgenexpression durch rekombinantes SALL4B: Ein pluripotenter Stammzellmarker

Mengru Yuan, Yun Wang, Zhihua Ren, Wei Dai und Yongping Jiang

SALL4 ist ein wichtiger Transkriptionsfaktor, der die Expansion hämatopoetischer Stammzellen unterstützt. Die Expression von SALL4 ist auch bei mehreren Arten von Leukämie dereguliert . Neuere Studien zeigen, dass SALL4B, eine wichtige Isoform von SALL4, durch posttranslationale Mechanismen stark modifiziert wird und diese Modifikationen für ihre Stabilität, subzelluläre Lokalisierung und transkriptionellen Aktivitäten entscheidend sind. Angesichts der Bedeutung von SALL4B für die Unterstützung der Selbsterneuerung und Expansion von Stammzellen haben wir einen groß angelegten Expressions- und Reinigungsprozess optimiert, um SALL4B mithilfe des Baculovirus-Expressionsvektorsystems zu erhalten. Rekombinantes TAT-SALL4B wurde unter nativen Bedingungen effizient durch Nickel-Affinitätschromatographie gereinigt . Durch Immunblotting wurde bestätigt, dass rekombinantes SALL4B stark exprimiert und gereinigt wurde. Als ersten Schritt zur Prüfung der biologischen Aktivität von gereinigtem TAT-SALL4B untersuchten wir, ob TATSALL4B, das direkt dem Kulturmedium zugesetzt wurde, durch den Proteintransduktionsprozess in Zellen eindringen kann. Fluoreszenzmikroskopie zeigte, dass rekombinantes TAT-SALL4B konzentrations- und zeitabhängig spezifisch im Zellkern lokalisiert wurde. Reportergen-Assays zeigten, dass gereinigtes TAT-SALL4B-Protein den OCT4-Genpromotor aktivierte, was darauf hindeutet, dass rekombinantes SALL4B in vivo transkriptionell aktiv war. Zusammengefasst deuten unsere Ergebnisse darauf hin, dass TAT-SALL4B ein vielversprechender Faktor zur Unterstützung der Ex-vivo-Expansion hämatopoetischer Stammzellen sein könnte .