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Abstrakt
Polypeptidprofilierung der Serumglobulin-Proteinfraktion des Pangasius-Welses (Pangasius pangasius) und Entwicklung eines Anti-Pangas-Serumglobulin-HRPO-Immunkonjugats zur schnellen Erkennung bakterieller Infektionen
Harresh Adikesavalu, Pradipta Paul, Siddhartha N. Joardar und Jawahar T. Abraham
Bakterielle Erkrankungen sind nach wie vor ein wichtiger Wirtschaftsfaktor für die kommerzielle Welszucht. Die korrekte Diagnose von Erkrankungen ist daher wichtig für wirksame Behandlungsmaßnahmen und zur Vermeidung von Produktionsverlusten. Ziel der vorliegenden Studie war die Fraktionierung und Charakterisierung der Serumglobulinproteine des Pangasius-Welses, Pangasius pangasius, durch Salzfraktionierung und SDS-PAGE-Analyse. Das Proteinprofil der fraktionierten Serumglobulinproteine von P. pangasius ergab insgesamt 12 Banden, nämlich 136,64, 120,58, 95,87, 79,92, 72,67, 63,04, 45,99, 43,32, 38,65, 34,82, 28,46 und 19,08 kDa. Anti-Pangas-Serumglobulin (ASG)-Meerrettichperoxidase (HRPO)-Immunkonjugat (ASGHRPO-Immunkonjugat) wurde nach dem Natriumperiodatverfahren hergestellt und Immunserum dagegen bei Kaninchen erzeugt. Die Seroreaktivität des ASG-HRPO-Immunkonjugats wurde mittels Dot-ELISA und direktem ELISA beurteilt. Im Dot-ELISA wurde die Entwicklung intensiver Farbflecken nur dann beobachtet, wenn das ASG-HRPO-Immunkonjugat entweder unverdünnt oder in einer Verdünnung von 1:10 verwendet wurde. Ebenso zeigten die Ergebnisse des direkten ELISA eine geringe Seroreaktivität bei einem Verdünnungstiterwert von <200 gegen die Pangas-Serumglobulin-Proteinfraktion als Antigen . Dot-ELISA wurde auch durchgeführt, um das Vorhandensein spezifischer Antikörper gegen Aeromonas hydrophila und Edwardsiella tarda in P. pangasius separat durch experimentelle Inokulation festzustellen. In beiden Fällen wurde die Entwicklung eines intensiven Farbflecks beobachtet, was wiederum die Spezifität des ASG-HRPO-Immunkonjugats beim Nachweis der Antikörper gegen A. hydrophila und E. tarda im Serum von P. pangasius anzeigt. Die Entwicklung des Farbflecks nach Zugabe von sensibilisiertem Fischimmunserum und Inkubation deutete darauf hin, dass das ASG-HRPO-Immunkonjugat zum Seromonitoring spezifischer Antikörper und zur Serodiagnose von durch E. tarda und A. hydrophila verursachten Krankheiten verwendet werden kann.