Zeitschrift für Stammzellforschung und -therapie

Abstrakt

Neuronales und gliales Wachstum in organotypischen Kulturen nach Vitrifikation

Arav Amir, Shahar Abraham, Ziv-Polat Ofra, Natan Yehudit und Patrizio Pasquale

Fetale Ratten-Dorsalwurzelganglien (DRG) und Rückenmarksscheiben (SC) von Rattenföten wurden in einem neuen halbautomatischen Vitrifikationssystem vitrifiziert, in steriler Slush Liquid Air (SLA) gekühlt und in einem speziellen sterilen versiegelten Behälter in flüssigem Stickstoff (LN) gelagert. Nach dem Erwärmen wurden organotypische stationäre Kulturen unter Verwendung von NVR-Gel (hauptsächlich bestehend aus Hyaluronsäure und Laminin) durchgeführt und mit neuronalen Faktoren angereichert, die an Eisenoxid-Nanopartikel konjugiert waren. Die Kulturen wurden durch tägliche Phasenkontrastmikroskopie-Beobachtungen und durch Immunfluoreszenzfärbung ausgewertet.
Die Ergebnisse zeigten, dass SC-Neuronen ihre multipolare Form beibehielten und Dendriten und Axone nachwuchsen. Die runden DRG-Neuronen wiesen euchromatische Kerne mit ausgeprägten Nukleoli und eine aktive Regeneration der Nervenfortsätze auf. Die Migration sowohl von Neuronen als auch von flachen Zellen (Fibroblasten und Glia-Schwann-Zellen) begann innerhalb von 48 Stunden nach der Aussaat und intensivierte sich in den folgenden Tagen.
Zusammenfassend kann gesagt werden, dass die Verwendung einer halbautomatischen Vitrifikation, sterilen Vitrifikation und sterilen Lagerung von Nervengewebe aus dem ZNS und dem PNS eine erfolgreiche fortschrittliche Technologie zur Konservierung von Neuronen und Gliazellen ist, wie die Wiederherstellung eines vollständig regelmäßigen Wachstumsmusters in der Kultur zeigt. Dies könnte ein wichtiger Schritt in Richtung klinischer Anwendung bei der Rekonstruktion schwerer Verletzungen der peripheren Nerven und des Rückenmarks sein.