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Abstrakt
Embryonale Fibroblasten von Mäusen entwickeln nach Differenzierung in insulinproduzierende Zellen das Potenzial zur Sarkomagenese
Gupta A, Kurtovic S, Ng TT, Tsuyoshi T, Narwani K, Biancotti JC, Spurka L, Funari V, Balzer B, Talavera-Adame D und Dafoe DC
Eine reichhaltige Quelle insulinproduzierender Zellen würde die Erfolgschancen von Inselzelltransplantationen zur Behandlung von Diabetes erhöhen. Insulinproduzierende Zellen können aus menschlichen Fibroblasten gewonnen werden, die einen mesenchymalen Stammzellphänotyp (MSC) entwickelt haben. Diese MSCs können jedoch nach Transformation Sarkome bilden. Unser Ziel war es zu untersuchen, ob embryonale Fibroblasten von Mäusen (MEF) nach Differenzierung zu insulinproduzierenden Zellen Sarkomagenesepotenzial entwickeln. Wir haben insulinproduzierende Zellen aus der MEF-Zelllinie MMMbz gewonnen. Nach der Differenzierung wurden die Zellen mit grünem fluoreszierendem Protein (GFP) markiert, das vom Ratten-Insulinpromotor (INS-GFP) gesteuert wurde, um die Zellen zu isolieren, zu expandieren und mittels Immunzytochemie (ICC), quantitativer RT-PCR (qRT-PCR) und genetischen Mikroarrays zu charakterisieren. Diese Zellen wurden dann FACS-sortiert und unter die Nierenkapsel von SCID-Mäusen transplantiert, um das Zellverhalten zu bewerten. Die transplantierten Zellen wurden mittels IHC analysiert. MMMbz exprimierte den Thrombozyten-Wachstumsfaktor-Rezeptor Alpha (PDGFR-α) und Nestin. Nach der Differenzierung wurde in sortierten Zellen eine höhere Expression von Betazellmarkern festgestellt als in nicht sortierten Zellen. Genetische Mikroarrays bestätigten die Expression von Pankreas- und Mesenchymmarkern zusammen mit der Aktivierung von Krebswegen. Innerhalb von 30 Tagen nach der Transplantation entwickelten alle transplantierten Mäuse undifferenzierte Sarkome, die weitere Untersuchungen der Funktion insulinproduzierender Zellen beeinträchtigten. Daher können insulinproduzierende Zelllinien in vitro aus embryonalen Mausfibroblasten gewonnen werden, die sich wie MSCs verhalten, aber das Sarkomagenese-Potenzial kann durch eine Subpopulation transformierter Zellen verliehen werden.