Zeitschrift für Stammzellforschung und -therapie

Abstrakt

Integration lentiviraler miRNA-Vektoren und Wirksamkeit der Genzielsteuerung bei kardialen Vorläuferzellen

Mariana Loperfido, Stefania Crippa und Maurilio Sampaolesi

Stamm- und Progenitorzellen des Herzens sind eine Herausforderung für eine mögliche Anwendung in der Zelltherapie. Mehrere Forschungslabore nutzen die Machbarkeit des autologen Zelltherapieansatzes, um immunsuppressive Behandlungen loszuwerden, die für unerwünschte Nebenwirkungen verantwortlich sind. Kürzlich haben wir gezeigt, dass Herzprogenitoren, die aus Sgcb-Nullmäusen, einem Tiermodell der Gliedergürtel-Muskeldystrophie Typ 2E, isoliert wurden, aufgrund der Dysregulation von miR669 in vitro und in vivo eine abweichende Differenzierung erfahren. Diese miRNA-Familie ist in der Lage, das skelettale myogene Programm zu hemmen, das direkt auf MyoD 3' UTR abzielt. Mithilfe der lentiviralen Technologie haben wir den Beweis erbracht, dass es möglich ist, den dystrophischen abweichenden Phänotyp durch Überexpression von miRNA669 ohne Genkorrektur zu retten. Es wurde jedoch nicht analysiert, wie die Viren, die die miRNAs tragen, bei der Transduktion im Genom positioniert wurden und wie ihr Lokalisierungsort das Rettungspotenzial beeinflussen könnte. Hier untersuchen wir das Integrationsprofil des lentiviralen Vektors, der das pre-miR669 trägt, in infizierten polyklonalen und klonalen Populationen, die von Sgcb-Herzvorläuferzellen abstammen. Unsere Studie zeigt, dass die retroviralen Insertionsstellen (RIS) weitgehend auf codierende Gene beschränkt sind (65 %). Trotz der Einschränkungen unserer Analyse fanden wir keine Treffer für krebsbezogene Gene, und mehrere sequenzierte RIS brachten Gene ans Licht, die hauptsächlich an der Muskelfunktion beteiligt sind. Unsere Daten zeigen also, dass das Insertionsprofil des lentiviralen Vektors zellspezifisch ist, der Chromatinzustand der Zielzellen jedoch die viralen Integrationen positiv beeinflusst.