Tom H. Jin, Tianli Qu, Anant Raina, Peter Alexander und Eric Tsao
Bacillus Calmette-Guérin-Impfstoffe (BCG) und rekombinante BCG-Impfstoffe (rBCG) können genetisch auf einen abgeschwächten Lebendstamm von Mycobacterium bovis zurückgeführt werden. Da die Lebensfähigkeit der Organismen für die Stimulierung einer schützenden Immunreaktion von entscheidender Bedeutung ist, ist die Überwachung der Anzahl lebender Organismen ein integraler Bestandteil der Qualitätskontrolle von Impfstoffen. Der Colonyforming Unit (CFU)-Test ist der herkömmliche Test zur Bestimmung der BCG-Lebensfähigkeit und ein weithin akzeptierter Ersatz für die BCG-Wirksamkeit. Die CFU-Analyse ist jedoch problematisch und zeitaufwändig. Die Langsamkeit und hohe Variabilität der CFU-Testergebnisse sind die Hauptgründe dafür, dass Hersteller und Kontrolllabore nach einem schnellen, reproduzierbareren alternativen Test zur Lebendzahlbestimmung suchen. Ein modifizierter Adenosintriphosphat (ATP)-Lumineszenztest wurde vom Statens Serum Institut entwickelt und von der WHO als alternativer Test zur Lebendzahlbestimmung gefördert. Allerdings müssen während der Probenvorbereitung und ATP-Extraktion bestimmte Bedingungen geschaffen werden, bevor der ATP-Test die Anforderungen an Robustheit und Reproduzierbarkeit erfüllen kann. Diese Studie konzentriert sich auf die Ermittlung der Bedingungen, die für einen zuverlässigen Prozess der ATP-Analyse für BCG/rBCG-Präparate erforderlich sind. Mithilfe unseres verbesserten ATP-Testprotokolls haben wir gezeigt, dass der Korrelationskoeffizient zwischen CFU-Zahl und ATP-Konzentration von BCG/rBCG-Impfstoffen hoch ist (R2 = 0,83 für Proben mit beschleunigter Stabilität und R2 > 0,97 für alle anderen Präparate). Der ATP-Lumineszenztest ist eine schnelle, empfindliche, zuverlässige und stammunabhängige Methode zur Quantifizierung der Lebensfähigkeit von Präparaten mit abgeschwächten Lebendimpfstoffen aus Mykobakterien.