Li-Yi Sun, Dian-Kun Li, Pao-Jen Chen, Yu-Yu Joyce Ho, Jon-Son Kuo, Ching-Feng Cheng, Kuei-Fang Lee, Yao-Jen Chang und Cheng-Yoong Pang
Ziel: Exzidiertes Fettgewebe (EFT) ist eine ausgezeichnete Quelle für aus Fettgewebe gewonnene Stammzellen (ADSCs) für die autologe Zelltherapie. Die derzeitige Technik zur Exzision von Fettgewebe mit herkömmlichen chirurgischen Scheren und unter Verwendung eines Kulturmediums mit fötalem Rinderserum (FBS) entspricht jedoch möglicherweise nicht den Richtlinien der Good Tissue Practice (GTP). Wir haben daher einen halbautomatischen Prozess entwickelt, der den oben genannten Richtlinien entspricht, um aus kleinen Mengen EFT ADSCs in klinischer Qualität herzustellen. Methoden: Es wurde ein halbautomatischer Prozess entwickelt, bei dem ein Einweg-Disperser-Röhrchen verwendet wird, das auf einer Tube Disperser Workstation betrieben wird, um die Stroma-Gefäßfraktion (SVF) aus EFT zu gewinnen. Ein mit humanem autologem Serum (HAS) und mesenchymalem Stammzellkultur-Adjuvans (MCA) ergänztes Kulturmedium, das aus basischem Fibroblasten-Wachstumsfaktor (bFGF/FGF-2) und Antioxidantien besteht, wurde formuliert, um ADSCs aus SVF in vitro zu expandieren. Ergebnisse: Der halbautomatische Prozess kann die Zellausbeute deutlich steigern und die Bearbeitungszeit für das Zerkleinern von Gewebe von einer Stunde auf wenige Minuten reduzieren. Das Wachstum der ADSCs war im 10 % HAS-Medium langsamer als im mit FBS angereicherten Medium, aber ihr Wachstum im 10 % HAS-Medium mit MCA (10 % HAS+MCA) war beiden Medien überlegen. Das 10 % HAS+MCA-Medium förderte auch die Adipogenese, Osteogenese, Chondrogenese und erhöhte die Expression von CD44, CD73 und den Stammzellengenen in den ADSCs. Schlussfolgerung: Unser neuartiger halbautomatischer Prozess ermöglicht eine effiziente Isolierung von SVF, und das 10 % HAS+MCA-Medium beschleunigt das Wachstum von ADSCs aus kleinen Mengen EFT, ohne dass ihre Differenzierungsfähigkeit verloren geht.