Zeitschrift für Stammzellforschung und -therapie

Abstrakt

Bewertung des Kulturmediums für menschliche Keratinozyten

Fabiana Regina Xavier Batista, Jussara Rehder und Maria Beatriz Puzzi

Menschliche Keratinozyten werden für das Tissue Engineering der Haut benötigt, das zur Gewebereparatur und -regeneration für klinische Zwecke eingesetzt wird. Bei der Zellproliferation ist es unerlässlich, in kurzer Zeit hohe Zellkonzentrationen zu erreichen. Für Wachstum und Erhalt dieser Zellen wird üblicherweise das MCDB-153-Medium verwendet, das mit Bestandteilen tierischen Ursprungs wie Wachstumsfaktoren und fötalem Rinderserum (FBS) angereichert ist. Ziel dieser Arbeit war die Bewertung verschiedener Formulierungen auf Basis des MCDB-153-Mediums für die Keratinozytenproliferation. Dazu wurden mehrere Experimente durchgeführt, um mithilfe eines 24-faktoriellen Designs zu bestimmen, welche Ergänzungsstoffe für die Hautzellkultur wichtig sind. Hautproben wurden von vier einwilligenden Patienten entnommen, die sich einer Dermolipektomie, einer plastischen Operation, unterzogen. Diese Fragmente wurden vier Stunden lang bei 37 °C mit 0,25 % Trypsin-EDTA behandelt. Außerdem wurde die Epidermis von der Dermis getrennt, wodurch Hautzellen gewonnen wurden. Batch-Kulturen wurden in 6- und 96-Well-Platten sowie in 25-cm2-Flaschen durchgeführt. Ergebnisse hinsichtlich Zellwachstum und Stoffwechsel zeigten, dass Keratinozyten in MCDB 153-Medium mit Insulin (7,5 µg.mL-1), Rinderhypophysenextrakt-BPE (80 µg.mL-1), epidermalem Wachstumsfaktor-EGF (0,08 µg.mL-1), Hydrocortison (0,63 µg.mL-1) und Glutamin (1 gL-1) vollständig gewachsen waren. Andererseits führten die im Versuchsaufbau vorgeschlagenen Kulturmedien nicht zu zufriedenstellendem Zellwachstum. Darüber hinaus wurde, obwohl die anfängliche Glukosekonzentration in den meisten Fällen niedrig war, von den Zellen bis zu einer Konzentration von 1 gL-1 viel Laktat produziert.