Michelle D de Oliveira, André S de Oliveira, Nina R Dutra, Rafael FO França, Eduardo R Honda, Fernando B Zanchi, Clovis A Neves, Cynthia C da Silva, Benedito AL da Fonseca und Sérgio O De Paula
Mehrere Versuche, rekombinante Untereinheitenimpfstoffe gegen Dengue zu entwickeln, scheiterten aufgrund unzureichender Expressionsniveaus und falscher Faltung des E-Proteins. Um die Bedeutung des Vorläufermembranproteins für das Niveau der E-Protein-Expression zu bestätigen, konstruierten wir zwei rekombinante Plasmide, indem wir die vollständige Sequenz des prM-Gens aus den Dengue-2- und Dengue-3-Virusstämmen in ein Plasmid klonierten, das eine verkürzte Version des E-Proteins des Dengue-2-Virus exprimiert. Als nächstes untersuchten wir diese beiden Konstrukte auf ihre Wirkung auf das Niveau der E-Protein-Expression in vitro. Unsere Ergebnisse zeigten, dass beide Plasmide eine korrekte Expression des E-Proteins lieferten, da die E-Protein-Expression in transfizierten Vero-Zellen nachgewiesen wurde, wie durch indirekte Immunfluoreszenz und Immunoblotting gezeigt wurde. Die Densitometrieanalyse der Western Blots der Zellextrakte zeigte eine um 67,02 % höhere Expression des E-Proteins in den mit pCID2EtD3prM transfizierten Zellen, was darauf hindeutet, dass die prM-Sequenz des Dengue-3-Virus möglicherweise wirksamer bei der korrekten Verarbeitung des E-Proteins hilft. Die Ergebnisse dieser Studie können verwendet werden, um die In-vitro-Produktion des E-Protein-Antigens für den Einsatz in Impfstoffen und für diagnostische Zwecke zu steigern.