Ji-Yeon Kim, Sung-Il Kang, Jin Ju Lee, Kichan Lee, So-Ra Sung, Suk Chan Jung, Yong Ho Park, Han-Sang Yoo und Moon Her
Um Brucellose effektiv zu diagnostizieren, wurden viele gattungs- und speziesspezifische Nachweismethoden auf PCR-Basis entwickelt. Neben herkömmlichen PCR-Tests wurden Echtzeit-PCR-Techniken als schnelle Diagnoseinstrumente entwickelt. Unter ihnen wurde die Echtzeit-PCR unter Verwendung einer Hybridisierungssonde (Hybprobe) für Bakterien mit hoher DNA-Homologie zwischen den Arten empfohlen, mit der eine genaue Diagnose anhand einer Amplifikationskurve und einer Schmelzspitzenanalyse möglich ist. Eine Hybprobe für B. abortus wurde aus einem spezifischen Einzelnukleotid-Polymorphismus (SNP) auf dem fbaA-Gen entwickelt. Diese Sonde zeigte erst ab etwa dem 14. Zyklus eine spezifische Amplifikation von B. abortus, wobei eine Schmelzspitze bei 69 °C festgestellt wurde. Die Empfindlichkeit der Echtzeit-PCR erwies sich bei 10-facher DNA-Verdünnung als 20 fg/μl, und die Nachweisgrenze lag bei 4 KBE in klinischen Proben. Diese Echtzeit-PCR zeigte eine höhere Empfindlichkeit als die der herkömmlichen PCR und der vorherigen Echtzeit-PCR auf Basis der Taqman-Sonde. Daher könnte dieser neue Echtzeit-PCR-Test hilfreich sein, um eine Infektion mit B. abortus schnell und genau zu differenzieren.