Zeitschrift für Pflanzenpathologie und Mikrobiologie

Abstrakt

Visuelle Erkennung des Curly-Top-Virus durch die kolorimetrische Loop-vermittelte isotherme Amplifikation

Mohammad Amin Almasi, Mehdi Aghapour-ojaghkandi und Saeedeh Aghaei

Das Curly-Top-Virus (CTV) in Zuckerrüben, das zur Familie der Geminiviridae gehört, Gattung Curtovirus, stellt in den semiariden Gebieten des Iran und anderen semiariden Teilen der Welt ein erhebliches Problem dar. Es gibt mehrere Diagnosemethoden zum Nachweis von CTV, aber diese Techniken dauern lange (3 Stunden bis 2 Tage) und erfordern hochentwickelte Instrumente. Das Ziel dieser Studie bestand erstmals darin, die zum Nachweis von CTV in Zuckerrüben erforderliche Zeit zu verkürzen, indem die kolorimetrische Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP)-Technik verwendet wurde, die nur ein gewöhnliches Wasserbad oder einen Thermoblock erfordert. DNA wurde aus natürlich infiziertem Blattgewebe extrahiert. Die Proben wurden mittels PCR- und LAMP-Reaktionen auf das Vorhandensein von Curtovirus-Arten getestet, um das Replikations-assoziierte Protein (rep)-Gen unter Verwendung von Art-Primern zu amplifizieren. LAMP wurde optimiert, um CTV-DNA unter isothermen Bedingungen durch Inkubation bei 63°C für 30 Minuten zu amplifizieren. LAMP-Produkte wurden visuell mithilfe der verschiedenen Farbstoffe nachgewiesen. Die LAMP-Amplifikationsprodukte hatten bei der Elektrophorese auf einem Agarosegel ein leiterartiges Aussehen, und positive Ergebnisse bei Verwendung der verschiedenen Farbstoffe zeigten eine Farbänderung. Die Ergebnisse bestätigten, dass LAMP mit verschiedenen Farbstoffen einen schnellen und sicheren Test zum Nachweis von CTV in Zuckerrüben bietet. Da bei anderen molekularen Methoden die Ausstattung von Laboren mit einem Thermocycler oder teuren Detektorsystemen unvermeidlich ist, erwies sich dieser Test als einfache, kostengünstige molekulare Methode, die das Potenzial hat, andere Diagnoseverfahren in Primärlaboren zu ersetzen, ohne dass teure Geräte oder spezielle Techniken erforderlich sind. Er kann auch als zuverlässiges alternatives Virusnachweissystem für weitere Untersuchungen in Betracht gezogen werden.