Zeitschrift für Bakteriologie und Parasitologie

Abstrakt

Transkriptionelle Aktivierung durch eine URE4-ähnliche Sequenz im EhPgp1-Genkernpromotor

ME Ramírez, DG Pérez, E Náder und C Gómez

EhPgp1 ​​ist eines der Multiresistenzgene, die in medikamentenresistenten Trophozoiten von Entamoeba histolytica exprimiert werden. Frühere Studien in unserem Labor haben gezeigt, dass zwei C/EBP-Stellen an der transkriptionellen Aktivierung dieses Gens beteiligt sind. Es gibt jedoch eine andere relevante Region, die ebenfalls die Regulierung der EhPgp1-Expression in Klon C2 steuert. In diesem Bericht liefern wir Beweise dafür, dass die Transkription des EhPgp1-Gens zumindest teilweise durch die cis-wirkenden R9-Wiederholungssequenzen und das EhEBP1-Protein reguliert wird. Die Strukturanalyse der Region von -234 bis -197 bp zeigt das Vorhandensein von zwei Wiederholungssequenzen von 9 bp [R9(1) und R9(2)], die sich bei -226 bis -203 bp befinden. Deletions- und Mutationsanalysen der R9-Motive reduzierten die Promotoraktivität in Trophozoiten von Klon C2 signifikant. EMSA-Experimente zeigten eine spezifische Bindung von Kernproteinen von E. histolytica an die R9-Sequenz. Während Wettbewerbstests zeigten, dass die Anwesenheit von mehr als einer R9-Sequenz für eine starke DNA-Protein-Interaktion notwendig ist. Darüber hinaus wurde in Western-Blot-Experimenten mit teilweise gereinigten Proteinen, die mit dem R9-Motiv interagieren, und Antikörpern gegen EhEBP1 ein 28 kDa großes Protein erkannt. Interessanterweise verhinderte dieser Antikörper in Supershift-Tests die Bildung von DNA-Protein-Interaktionen der R9-Sequenzen und Kernproteinen von Amöben, was darauf hindeutet, dass eines der Proteine, die mit dem R9-Element interagieren, ein EhEBP1-ähnliches ist. Abschließend zeigen wir, dass R9-Motive von einem EhEBP1-Protein erkannt werden und die EhPgp1-Genexpression aktivieren.