Abstrakt

Strategien und bewährte Verfahren zum Klonen kleiner RNAs

Hui Dai, Weifeng Gu

Die Hochdurchsatzsequenzierung hat sich vor allem aufgrund ihrer Sensitivität und Benutzerfreundlichkeit zu einem standardmäßigen und leistungsstarken Verfahren zur Analyse von Nukleinsäuren entwickelt. Kleine RNAs spielen eine wichtige Rolle bei der Regulierung zellulärer und viraler Gene. Die herkömmlichen Methoden zur Analyse kleiner RNAs sind langwierig und weisen häufig keine Genauigkeit, Spezifität und Sensitivität für viele kleine RNA-Arten auf. Daher ist die Hochdurchsatzsequenzierung zu einem unverzichtbaren Verfahren zur Analyse kleiner RNAs geworden. Es ist jedoch eine Herausforderung, eine zuverlässige und repräsentative kleine RNA-Bibliothek für die Hochdurchsatzsequenzierung zu erzeugen, da kleine RNAs normalerweise auf extrem niedrigem Niveau exprimiert werden und häufig Modifikationen enthalten, die den Aufbau der Bibliothek beeinträchtigen und normalerweise zu verzerrten Ergebnissen führen. In diesem Bericht werden verschiedene Strategien zur Erzeugung kleiner RNA-Bibliotheken mit hoher Qualität und Zuverlässigkeit verglichen und Empfehlungen zu Best Practices bei der Erstellung von RNA-Bibliotheken für die Hochdurchsatzsequenzierung gegeben.

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