Mundgesundheit und Zahnmanagement

Abstrakt

Standardisierung der Isolierung und Expansion von Bindegewebszellen der Mundschleimhaut

Fernandes LA, Nascimento BL, Lucato-Budziak MC, Figueiredo CM, Carneiro E

Ziel: Ziel dieser Studie war es, ein Protokoll für die Isolierung und Expansion einer fibromesenchymalen Zellpopulation aus dem Bindegewebe der Mundschleimhaut für zukünftige Bioengineering-Protokolle zu erstellen. Methoden: Für die Isolierung von Fibroblasten und Progenitorzellen verwendeten wir Teile von Operationsproben von Patienten mit einer Indikation für eine orale Operation. Das Protokoll für die Isolierung war wie folgt: Das Gewebe wurde mit phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) gewaschen, die mit einem Antibiotikum-Antimykotikum (PSA) ergänzt wurde. Das Gewebe wurde in ein Reagenzglas mit Kollagenase Typ II gegeben und über Nacht im Ofen inkubiert. Nach der Inkubation wurde die Kollagenase gesammelt und das Gewebe erneut einmal mit PBS +PSA gewaschen. Anschließend wurde der Colony-Forming Unit (CFU)-Test durchgeführt. Die Zellen (1,0 × 105 ) wurden auf eine 10 cm² große Schale mit Dulbeccos modifiziertem Eagle's Medium (DMEM) mit hohem Traubenzuckergehalt, ergänzt mit 10 % fötalem Rinderserum (FBS), aufgebracht. Die Zellen wurden mit 10 % Formalin fixiert und mit Kristallviolett gefärbt, bevor die Kolonien gezählt wurden. Der Test wurde in dreifacher Ausfertigung durchgeführt. Ergebnisse: Die Zellen aus allen Proben zeigten eine homogene Morphologie mit einem charakteristischen sternförmigen Aussehen. Der einzige Unterschied bestand in der Zahl der gebildeten Kolonien. Es gab eine signifikante Zunahme der Zahl der am Tag 1 gebildeten Kolonien im Vergleich zu den am Tag 0 gebildeten Kolonien und eine signifikante Abnahme im Vergleich zu den am Tag 2 gebildeten Kolonien. Schlussfolgerung: Es war möglich, ein Protokoll für die Primärkultur von Fibroblasten aus der menschlichen Mundschleimhaut zu erstellen.