Zeitschrift für Bioäquivalenz und Bioverfügbarkeit

Abstrakt

Gleichzeitige Quantifizierung von Vitamin D-2, Vitamin D-3 und ihren 25-Hydroxymetaboliten in menschlichem Plasma mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie

Syed N. Alvi, Ahmed Yusuf und Muhammad M. Hammami

Eine einfache und zuverlässige Methode mittels Hochleistungsflüssigchromatographie (HPLC) zur gleichzeitigen Bestimmung von Vitamin D-2 (VD-2), Vitamin D-3 (VD-3), 25-Hydroxyvitamin D-2 [25 (OH) VD-2] und 25-Hydroxyvitamin D-3 [25(OH) VD-3] in menschlichem Plasma wurde entwickelt und validiert. Plasmaproben wurden mit einer Mischung aus Methanol und 2-Propanol entproteinisiert und mit Hexan extrahiert. Nach dem Eindampfen wurde der Rückstand in Methanol:Wasser (9,6:0,4, v/v) gelöst, zentrifugiert und anschließend die klare Lösung auf eine Zorbax C18-Säule injiziert. Die mobile Phase (Gradientenelutionsmodus) besteht aus Methanol, Acetonitril und Wasser (pH = 3,0); die Eluenten wurden mit einem Photodiodenarraydetektor (Wellenlänge auf 265 nm eingestellt) überwacht. Die Beziehung zwischen der Konzentration von VD-2, VD-3, 25(OH) VD-2, 25(OH) VD-3 im Plasma und ihrem Peakflächenverhältnis zum IS war im Bereich von 5 - 100 ng/ml linear. Die Variationskoeffizienten für die Inter-Day- und Intra-Day-Tests lagen alle bei ≤ 9,7 % und die Abweichungen bei ≤ 13,1 %. Die mittleren Extraktionsrückgewinnungsraten von VD-2, VD-3, 25(OH) VD-2 und 25(OH) VD-3 aus dem Plasma lagen alle über 80 %. Die Methode wurde zur Bestimmung des Vitamin-D-Spiegels in Plasma von gesunden Probanden angewendet. Außerdem wurde sie verwendet, um die Stabilität von VD-2, VD-3, 25(OH) VD-2 und 25(OH) VD-3 im Plasma unter verschiedenen im klinischen Labor angetroffenen Bedingungen zu beurteilen.