Rathee Dharmender, Thanki Madhavi, Agrawal Reena und Anandjiwala Sheetal
In diesem Artikel berichten wir über unsere Arbeit zur Entwicklung und Validierung einer densitometrischen DC-Methode zur gleichzeitigen Quantifizierung von Bergenin, (+)-Catechin, Gallicin und Gallussäure sowie zur Quantifizierung von β-Sitosterol mittels HPTLC. Nach bestem Wissen und Gewissen ist dies der erste Bericht über die gleichzeitige Quantifizierung dieser vier bioaktiven Verbindungen, nämlich Bergenin, (+)-Catechin, Gallicin und Gallussäure mittels HPTLC aus dieser Pflanze. Die gleichzeitige Quantifizierung von Bergenin, (+)-Catechin, Gallicin und Gallussäure erfolgte aus dem methanolischen und hydrolysierten Extrakt (2N HCl) unter Verwendung des Lösungsmittelsystems Toluol: Ethylacetat: Ameisensäure (6: 6: 1, v/v/v). β-Sitosterol wurde aus Petroletherextrakt unter Verwendung des Lösungsmittelsystems Toluol: Methanol (9:1, v/v) quantifiziert. Die Methoden wurden unter Verwendung der ICH-Richtlinien hinsichtlich Präzision, Wiederholbarkeit und Genauigkeit validiert. Die densitometrischen Methoden der Dünnschichtchromatographie erwiesen sich als präzise mit RSD für Intra-Day im Bereich von 2,62–4,26, 0,35–2,5, 0,61–1,83, 1,14–1,57 und 0,15–0,52 und für Inter-Day im Bereich von 1,90–4,27, 0,85–3,05, 0,97–1,45, 0,58–1,27 und 0,26–0,61 für unterschiedliche Konzentrationen von Bergenin, (+)-Catechin, Gallicin, Gallussäure bzw. β-Sitosterol. Die Linearitätsbereiche für Bergenin, (+)-Catechin, Gallicin und Gallussäure waren gleich (160 –720 ng/Spot) mit Korrelationskoeffizienten (r-Werte) von 0,999, 0,997, 0,998 bzw. 0,996. Der Linearitätsbereich für β-Sitosterol betrug 80–480 ng/Spot mit Korrelationskoeffizienten (r-Werte) von 0,995. Die instrumentelle Präzision betrug 3,39, 3,36, 3,05, 1,20 und 0,85 (% RSD) für Bergenin, (+)-Catechin, Gallicin, Gallussäure bzw. β-Sitosterol. Die Genauigkeit der Methode wurde durch die Durchführung von Wiederfindungsstudien auf drei verschiedenen Niveaus für beide Verbindungen geprüft. Die durchschnittlichen prozentualen Wiederfindungen betrugen 100,38, 101,45, 102,38, 99,9 und 99,92 % für Bergenin, (+)-Catechin, Gallicin, Gallussäure und -Sitosterol. Die Mengen an Bergenin, (+)-Catechin und Gallussäure betrugen 0,22, 0,063 und 0,25 % w/w, während Gallicin nicht in nachweisbarer Menge vorlag. Die entwickelte Methode ermöglichte die gleichzeitige Quantifizierung von Bergenin, (+)-Catechin, Gallicin und Gallussäure und zeigte eine gute Auflösung und Trennung von anderen Bestandteilen des Extrakts und erwies sich als einfach, präzise, spezifisch, empfindlich und genau. Sie kann zur routinemäßigen Qualitätskontrolle von pflanzlichem Material und Formulierungen mit Bergenia ciliata eingesetzt werden.