Zeitschrift für Bioäquivalenz und Bioverfügbarkeit

Abstrakt

Gleichzeitige Bestimmung von Fluoxetin und Norfluoxetin im Plasma mittels RP-HPLC unter Einsatz einer Vorsäulenderivatisierung zur Verbesserung der UV-Empfindlichkeit

Smita T. Kumbhar, Kundan B. Ingale Prafulla B. Choudhari und Manish S. Bhatia

Es wird eine schnelle Hochleistungsflüssigchromatographiemethode zur gleichzeitigen Bestimmung des weit verbreiteten Antidepressivums Fluoxetin und seines Hauptmetaboliten Norfluoxetin im menschlichen Plasma beschrieben. Um die begrenzten Empfindlichkeitseigenschaften von Norfluoxetin zu überwinden, wurde eine Vorsäulenderivatisierung von Norfluoxetin mit 4-Dimethylaminobenzaldehyd (PDAB) durchgeführt. Nach der Flüssig-Flüssig-Extraktion wurden die Analyten und der interne Standard mithilfe einer Umkehrphasen-HIQ-Sil-ODS-Säule (250 mm Länge x 4,6 mm Innendurchmesser) von KYA TECH (Japan) von Interferenzen mit der endogenen Matrix getrennt und durch Ultraviolettabsorption bei 227 nm untersucht. Die isokratische mobile Phase (1 ml/min.), bestehend aus Acetonitril: Wasser: Triethylamin: 0,01 M Orthophosphorsäure (OPA) (70:30:0,5:2), wurde verwendet, um Fluoxetin, Norfluoxetin und den internen Standard Nebivolol zu trennen. Die relativen Retentionszeiten betrugen 2,49, 4,24 und 7,29 Minuten für Norfluoxetin, Fluoxetin bzw. Nebivolol. Die chromatographische Laufzeit betrug 10 Minuten und die Peakflächenverhältnisse von Analyten zu IS wurden für die Regressionsanalyse der Kalibrierungskurve verwendet. Für beide Substanzen wurde Linearität über den Konzentrationsbereich von 10-60 μg/ml erreicht. Die mittlere %-Wiederfindung ± SD betrug 101,23 % ± 1,0 bzw. 100,69 ± 0,67 für Fluoxetin bzw. Norfluoxetin. Die Methode scheint hinsichtlich Genauigkeit und Präzision für die Bestimmung der Fluoxetin-Plasmaspiegel von Patienten geeignet zu sein; außerdem ist sie schnell und empfindlich.