Pharmaceutica Analytica Acta

Abstrakt

Signifikante Leistungsverbesserungen bei einem etablierten Affinitätschromatographieverfahren zur Reinigung eines monoklonalen Antikörpers in 100 Reinigungszyklen

Williams Ferro, Rodolfo Valdés, Eutimio Fernández, Yarysel Guevara, Yenisley Medina, Tatiana Álvarez, Andrés Tamayo, Tatiana González, Mayra Wood, Maylín La O, Yodelvis Calvo und Déborah Geada

Die Protein-A-Sepharose-Affinitätschromatographie ist eine sehr erfolgreiche Methode zur Reinigung von Immunglobulinen für die pharmazeutische Verwendung. Die Chromatographieeffizienz und -lebensdauer dieser Methode müssen jedoch immer an die spezifischen Chromatographiebedingungen (biologische Quelle, Puffer, Durchflussraten, Antikörpereigenschaften, Temperatur, Proteinkonzentration, Reinigungsprotokoll usw.) angepasst werden. Ziel dieser Studie war es, Verbesserungen in der Leistung eines etablierten Affinitätschromatographieverfahrens nachzuweisen, das zur Reinigung des CB.Hep-1-monoklonalen Antikörpers (mAb) verwendet wird, der zur Reinigung des aktiven pharmazeutischen Inhaltsstoffs eines Hepatitis-B-Impfstoffs verwendet wird. Abschließend lässt sich sagen, dass die relativ schlechte mAb-Rückgewinnung, die unter den Bedingungen des Puffersystems 150 mM PBS; pH 8,0/100 mM Zitronensäure; pH 3,0 beobachtet wurde, auf die Unwirksamkeit des Elutionspuffers zurückzuführen ist, die Wechselwirkungen zwischen der Matrix und dem mAb vollständig zu unterbrechen. In dieser Hinsicht wurde die Retention des CB.Hep-1-mAb in der Matrix durch den an die Matrix gekoppelten Liganden und nicht durch unspezifische Wechselwirkungen unterstützt. Das Puffersystem 1,5 M Glycin-NaOH/3 M NaCl; pH 9,0/200 mM Glycin-HCl; pH 2,5 verbesserte die Affinitätschromatographie-Rückgewinnung erheblich, ohne die mAb-Reinheit, molekulare Homogenität, Ligandenleckage und den Maus-DNA-Gehalt in 100 Reinigungszyklen zu beeinträchtigen. Somit ermöglichte die Anwendung von 1,5 M Glycin-NaOH/3 M NaCl; pH 9,0/200 mM Glycin-HCl; pH 2,5 als Puffersystem die Senkung der Kosten für CB.Hep-1 mAb bzw. Hepatitis B-Impfstoff.