Moderne Chemie und Anwendungen

Abstrakt

Kurze und robuste HPLC-UV-Methode zur Bestimmung der Ribavirinkonzentration im Serum ohne Verdampfungsschritt

Abdul Rafiq Khan, Ali Al-Othaim, Khalid Muhammed Khan, Shazia Mrtaza, Sara Altraif, Waleed Tamimi, Waqas Jamil und Ibrahim Altraif

Ziel: Die Messung von Ribavirin (RBV) ist wichtig für die therapeutische Arzneimittelüberwachung bei Hepatitis C-Patienten. Eine einfache und schnelle Hochleistungsflüssigchromatographie (HPLC)-Methode wurde entwickelt und validiert, um die Ribavirinkonzentration in Serumproben ohne Verdampfungsschritt zu messen.

Design und Methode: Etwa 500 μl Serumprobe, 50 μl interner Standard und 20 mM Ammoniumacetatpuffer (pH = 8,5) wurden 30 Sekunden lang gemischt und zentrifugiert. Der Überstand wurde zur Festphasenextraktion in vorkonditionierte Phenylboronsäurekartuschen überführt. Alle Kartuschen wurden zwei Mal mit 1 ml 20 mM Ammoniumacetatpuffer unter einem Vakuum von nicht mehr als 10 psi gewaschen. Ribavirin und interner Standard wurden mit 300 μl 3%iger Ameisensäure eluiert. Ein Aliquot von 100 μl wurde in das HPLC-System injiziert.

Ergebnisse: Die Methode war im Bereich von 0,1–8,0 mg/l linear, mit 0,05 mg/l als Nachweisgrenze. Der Korrelationskoeffizient des Methodenvergleichs betrug 0,975 mit einem p-Wert von 0,116, was eine gute Reproduzierbarkeit der Ergebnisse zeigt. Die mittlere Genauigkeit wurde bei drei verschiedenen Konzentrationen überprüft und lag für alle drei Stufen zwischen 107–110 %. Die Extraktionseffizienz betrug 65,5 % für Ribavirin im Bereich von 0,1–8,0 mg/l und 71,2 % für den internen Standard bei 50 mg/l. Die Intraassay-Präzisionen wurden bei 0,5, 2,5 und 5,0 mg/l bestimmt und die % CV-Werte betrugen 2,2 %, 5,0 % bzw. 4,5 %. Die Injektionsreproduzierbarkeit bei drei Stufen betrug 5,5 %, 6,1 % und 3,3 %. Durch den Wegfall des Schwerkraftflusses und des Verdampfungsschritts wird diese Methode für die Routineanalyse von Ribavirinproben schneller und einfacher.

Schlussfolgerung: Die neu entwickelte HPLC-Methode war schneller, genauer und empfindlicher. Sie wurde zur Bestimmung des Serum-Ribavirinspiegels bei Hepatitis-C-Patienten in unserem Krankenhaus eingesetzt.