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Abstrakt
Aus abgelaufenem Frischplasma und Kryoüberstand hergestelltes Serum unterstützt die Proliferation menschlicher Zellen: Kostengünstige Alternativen zu fötalem Kälberserum
Kazuki Ishiyama, Mika Ogawa, Hidefumi Kato, Kyosuke Takeshita, Ryuzo Ueda, Takayuki Nakayama*
Hintergrund: Fötales Rinderserum (FBS) ist der am häufigsten in der Zellkultur verwendete Wachstumsfaktor. Mit der Verbreitung von Zelltherapien steigt jedoch die Nachfrage nach xenofreien Zellkulturzusätzen für den klinischen Einsatz, die den Standards der guten Herstellungspraxis entsprechen. Menschliches Serum wurde als Alternative zu FBS vorgeschlagen. Aufgrund der begrenzten Verfügbarkeit von Spendern und der effektiven Nutzung medizinischer Ressourcen haben wir versucht, Serum aus abgelaufenem Frischgefrorenem Plasma (FFP) und Kryosupernatant (CS) herzustellen und sie als FBS-Ersatz zu testen.
Ergebnisse: Wir stellten fest, dass eine einstündige Inkubation von FFP oder CS mit einem physiologischen Thrombin- und Alkalichloridspiegel (CaCl 2 ) praktisch das gesamte Fibrinogen verbrauchte. Vergleichende Proliferationsstudien mit FBS und menschlichen Thrombozytenlysaten (hPLs) zeigten, dass FFP-Serum im Vergleich zu FBS ähnliche oder stärkere proliferative Wirkungen auf 8 menschliche Zelllinien zeigte: Aus Knochenmark stammende mesenchymale Stromazellen (BMSC), aus Fettgewebe stammende mesenchymale Stromazellen (ADSC), HeLa, 293T, MG-63, HL-60, K562 und Meg-A2, mit Ausnahme von Saos-2-Zellen, während CS-Serum schwächere proliferative Wirkungen auf BMSC-, ADSC- und Saos-2-Zellen zeigte. hPL förderte das Wachstum von BMSC- und ADSC-Zellen stärker als FFP- und CS-Serum.
Schlussfolgerungen: FFP- und CS-Serum können mit Thrombin und CaCl 2 schnell und blutproduktschonend hergestellt werden und fungieren als wirksame Alternativen zu FBS für die Kultivierung menschlicher Zellen.