Zeitschrift für Bioäquivalenz und Bioverfügbarkeit

Abstrakt

Schnelle Gleichgewichtsdialyse (RED): eine In-vitro-Hochdurchsatz-Screening-Technik für die Plasmaproteinbindung unter Verwendung von menschlichem und Rattenplasma

Jitendra Kumar Singh, Anant Solanki, Reema C Maniyar, Debarupa Banerjee und Vikas S Shirsath

Die Bestimmung des Ausmaßes, in dem ein Molekül an Plasmaproteine ​​bindet, ist eine kritische Phase der Arzneimittelentwicklung, da die Menge des im Plasma gebundenen Arzneimittels die Dosierung der Verbindung, die Wirksamkeit, die Clearance-Rate und das Potenzial für Arzneimittelwechselwirkungen beeinflusst. Die Bestimmung der freien (%Fu) und gebundenen (%Bound) Anteile eines Testartikels im Plasma ist daher ein kritischer Parameter, der im Prozess der Arzneimittelentdeckung und -entwicklung routinemäßig bestimmt wird. Diese Bestimmung wird durch Gleichgewichtsdialyse ermöglicht, eine anerkannte und standardmäßige Methode zur zuverlässigen Schätzung des nicht gebundenen Arzneimittelanteils im Plasma. Obwohl es die bevorzugte Methode ist, war die Gleichgewichtsdialyse in der Vergangenheit arbeitsintensiv, zeitaufwändig, kostenintensiv und schwer zu automatisieren. Ein Arzneimittel-Protein-Bindungstest mit schneller Gleichgewichtsdialyse (RED) unter Verwendung von LC-MS/MS wurde unter Verwendung einer neuartigen Technik entwickelt, die zu einer deutlich verbesserten Testpräzision führte und einen Geschwindigkeitsvorteil bietet. Eine Reihe von Verbindungen, die einen Bereich der erwarteten Proteinbindung abdecken, wurde im Plasma von Menschen und Ratten getestet. Zur Quantifizierung ungebundener Arzneimittel in vorbehandeltem Plasma wurde eine empfindliche und selektive Methode entwickelt, bei der ein Quadrupel-Tandem-Massenspektrometer mit Elektrospray-Ionisations-Schnittstelle zum Einsatz kommt. Die verwendeten mobilen Phasen waren 0,1 % Ameisensäure in Acetonitril und 0,1 % Ameisensäure in Wasser mit Gradienten-HPLC-Methode. Der ungebundene Anteil der Arzneimittel wurde mit einem Massenspektrometer im ESI-Modus nachgewiesen. Darüber hinaus wurden die Daten für einen Satz von zehn Verbindungen mit Literaturwerten verglichen. Mit der beschriebenen Methode ist es möglich, in einer Arzneimittelentdeckungsumgebung eine relativ große Anzahl von Verbindungen auf PPB zu prüfen.