Biochemie und analytische Biochemie

Abstrakt

Schnelle Erkennung von Proteinen durch eindimensionale Polyacrylamid-Gelelektrophorese mit einem kostengünstigen fluoreszierenden optischen Aufheller

Sashidhar RB, Tanuja Kosuri und Sujata Nayak

Der kommerzielle optische Fluoreszenzaufheller Ranipal ^® (F-OB) für Textilien wurde erfolgreich zum Färben von Proteinen auf nativer und SDS -1D-PAGE eingesetzt. F-OB wurde mithilfe eines zweiphasigen Lösungsmittelsystems aus Dichlormethan und Wasser gereinigt. Die R _f -Werte (0,63) von gereinigtem und rohem F-OB waren auf DC vergleichbar. Die Massenspektrometrie von gereinigtem F-OB zeigte einen Basispeak bei 414 (m/z). Absorptions- und Emissionsmaxima von F-OB lagen bei 350 nm bzw. 430 nm. F-OB konnte die Proteine ​​auf nativem Gel sowohl vor als auch nach dem elektrophoretischen Lauf färben. Die postelektrophoretische Färbung ging schnell und erforderte 20 Minuten, um die gefärbten Proteine ​​sichtbar zu machen. Andererseits waren in SDS-Gelen weitere 20 Minuten für die Extraktion von SDS erforderlich, bevor die Proteine ​​mit F-OB gefärbt wurden. Es wurde festgestellt, dass SDS die Bindung von F-OB an Proteine ​​stört. Es wurden unterschiedliche Konzentrationen von Molekulargewichtsmarkern geladen und ihre Fluoreszenzintensität gegen die Konzentration der Proteine ​​aufgetragen. Die r ² -Werte lagen zwischen 0,965 und 0,997, was auf eine ausgezeichnete Linearität hinweist. Die Nachweisrate für Carboanhydrase lag im Bereich von 8,0–800 ng. Anders als die meisten Farbstoffe, die zur Proteinfärbung verwendet werden, konnte die Färbung mit F-OB in Tankpuffer (2 mg/100 ml) durchgeführt werden und war zudem reversibel. F-OB ist möglicherweise der kostengünstigste Fluoreszenzfarbstoff zur Färbung von Proteinen (0,04 US-Dollar/25,0 g). F-OB erwies sich als einfacher, sicherer, empfindlicher, weniger zeitaufwendiger und wirtschaftlicher Fluoreszenzfarbstoff als Alternative zur Färbung von Proteinen auf Polyacrylamidgelen.