Zeitschrift für mikrobielle und biochemische Technologie

Abstrakt

Produktion, Reinigung und Charakterisierung von L-Asparaginase aus marinem endophytischem Aspergillus sp. ALAA-2000 mittels Submers- und Feststofffermentation

Mervat Morsy Abbas Ahmed, Nageh Abo Dahab F, Taher Taha M und Fareed Hassan SM

Von allen aus dem weichen Meeresschwamm Aplysina fistularis gewonnenen endophytischen Pilzen waren 72,2 % in der Lage, L-Asparaginase zu produzieren. Unter allen erhaltenen Isolaten wurde Aspergillus sp. ALAA-2000, der hyperaktive Produzent des Antikrebsmittels L-Asparaginase, durch Submersfermentation (SMF) und Feststofffermentation (SSF) verschiedener landwirtschaftlicher Abfälle ausgewählt zur Optimierung des Extraktionsprozesses, zur Optimierung der physikochemischen Parameter, die die Produktion von L-Asparaginasen in SSF beeinflussen, und zur Optimierung der Parameter der gereinigten L-Asparaginasen. Die maximale L-Asparaginase-Aktivität von 23,34 U/ml wurde aus Sojabohnen mit 40 °C heißem Wasser und 150 U/min für 30 min unter SSF und 30,64 U/ml durch Submersfermentation mit Glucose als Kohlenstoffquelle und Asparagin als Stickstoffquelle gewonnen. Zwei Arten von L-Asparaginase (AYA-1 und AYA-2) wurden aus dem Kulturüberstand von Aspergillus sp. ALAA-2000 durch Ammoniumsulfatfällung und Gelfiltrationschromatographie (Sephadex G-200) gereinigt. Die Molekulargewichte der Enzyme betrugen 25 kDa (AYA-1) und 31 kDa (AYA-2). Die Parameter der gereinigten L-Asparaginase wurden für AYA-1 (pH 6,0, 60 min stabil bei 30–50 °C, Reaktionszeit 15 min und Substratkonzentration 1,275 mg/ml) und das Enzym AYA-2 (pH 10, 60 min stabil bei 30–70 °C, Reaktionszeit 15 min und Substratkonzentration 1,275 mg/ml) optimiert. Inhibitoren von Metalloproteasen, Chelatbildner wie EDTA, hatten hingegen keine Wirkung auf L-Asparaginase. Diese Ergebnisse lassen darauf schließen, dass es sich bei L-Asparaginase nicht um eine Metalloprotease handelte.