Zeitschrift für Bakteriologie und Parasitologie

Abstrakt

Produktion und Charakterisierung des Staphylokinase-Enzyms aus Staphylococcusaureus ASIA4

Nourah Hassan Alzahrani, Fareed Shawky El-Shenawy*

Sechs klinische Stämme von Staphylococcus aureus, isoliert aus verschiedenen klinischen Proben. Die Isolate ASIA1 und ASIA2, isoliert aus Urinproben von Patienten mit Harnwegsinfektionen; ASIA3, isoliert aus Abstrichproben von Patienten mit Brandabszessen im Universitätskrankenhaus Assiut, sowie ASIA4, ASIA5 und ASIA6, gewonnen aus Blutproben verschiedener Krebspatienten im South Egypt Cancer Institute. Alle Isolate zeigten unterschiedliche Fähigkeiten, Halo-Hydrolysezonen mit unterschiedlichen Durchmessern auf Blutagar, erhitztem Plasmaagar, Caseinagar und Magermilchagarplatten zu produzieren, zusammen mit unterschiedlichen Prozentsätzen der Gerinnsellyse. Staphylococcus aureus ASIA3, ASIA4 und ASIA6 produzierten 4,83, 5,98 und 2,08 U/ml Staphylokinase auf Trypton-Soja-Brühe, reduziert auf 1,95, 2,08 bzw. 1,70 U/ml auf Casein-Hydrolysat-Hefeextrakt-Brühe. Andererseits ergaben Staphylococcus aureus ASIA1, ASIA2 und ASIA5 2,20, 2,93 und 3,65 U/ml auf CYEB im Vergleich zu 2,10, 1,88 und 3,41 U/ml auf TSB als Produktionsmedium. Die aus dem hyperaktiven Produzenten Staphylococcus aureus ASIA4 gewonnene Staphylokinase wurde auf dem optimierten Fermentationsmedium, das aus 5,0 g Saccharose als Kohlenstoffquelle, 10,0 g Sojabohnen als Stickstoffquelle, 5,0 g NaCl, 5,0 g K2HPO4 und einem pH-Wert von 7,0 bestand, das mit dem Isolat ASIA4 beimpft und 24 Stunden bei 35 °C inkubiert wurde, um das 7,64-fache (von 2,08 U/ml auf 15,88 U/ml) erhöht. Darüber hinaus erreichte die Staphylokinaseaktivität ihren Höhepunkt bei den optimalen enzymatischen Reaktionsbedingungen, nämlich Reaktionszeit 25 Minuten, Casein als Substrat, Reaktions-pH 8,0, Reaktionstemperatur 40 °C. Darüber hinaus behielt sie 100 % ihrer Aktivität bei Temperaturen zwischen 15 und 45 °C und pH-Werten zwischen 6,0 und 9,0. EDTA hemmte die Enzymaktivität um 3,0 % bis 32,2 %, wenn seine Werte von 30,0 auf 90,0 mM anstiegen. MgCl2 in einer Konzentration von 30 mM erhöhte die Enzymaktivität um 4 % und nahm dann bei höheren Konzentrationen leicht ab, aber NaCl war bei Konzentrationen unter 90 mM ein starker Staphylokinaseaktivator.