Biochemie und analytische Biochemie

Abstrakt

Herstellung eines monoklonalen Antikörpers gegen Saikosaponin C und Etablierung seines Enzymimmunoassays

Baoping Qu, Jiayang Sai, Huihua Qu, Shuchen Liu, Jinjun Cheng, Wenchao Shan, Yan Zhao und Qingguo Wang

Ein monoklonaler Antikörper (MAb) 1E11D8 gegen Saikosaponin c (SSc) wurde durch eine Zellfusion mit Splenocyten und der Hypoxanthin-Aminopterin-Thymidin-sensitiven Maus-Myelom-Zelllinie SP2/0 hergestellt. Der hergestellte Anti-SSc MAb-1E11D8 weist eine neuartige Eigenschaft auf, die eine hohe Spezifität für Saikosaponin c, Saikosaponin d und Saikosaponin a, drei wichtige Oleanan-Saponine in Radix Bupleuri, zeigt. Unter Verwendung von Anti-SSc MAb-1E11D8 wurde ein zuverlässiger ELISA zum Nachweis von SSc entwickelt. Das System zeigt einen vollständigen Messbereich von 156,25 ng·mL-1 bis 2500 ng·mL-1 im Fall von SSc im indirekten kompetitiven ELISA (icELISA). Die Regressionsgleichung war y=-0,283 ln(C) +2,3301 mit einem Korrelationskoeffizienten von 0,99. Präzision und Genauigkeit der icELISA-Methode wurden anhand der Abweichungen zwischen Replikaten von Vertiefung zu Vertiefung (Intra-Assay) und von Platte zu Platte (Inter-Assay) bewertet. Die für diese Parameter erhaltenen Werte lagen im normalen Bereich (<10 %). Die Wiederfindungsraten lagen zwischen 99,82 und 103,59 %. Die ELISA-Methode wurde weiter als nützlich für die Untersuchung von SSc in traditionellen chinesischen Rezepten validiert.