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Abstrakt
Vorläufige Bewertung des Nachweises von Mycobacterium tuberculosis in Kultur und künstlichem Sputum mithilfe einer BioNanoPore-Membran und Echtzeit-PCR
James V. Rogers und Young W. Choi
Der rasche Nachweis und die Diagnose von Mycobacterium tuberculosis sind entscheidend für die Beurteilung der Schwere der Krankheit,
der Wirksamkeit von Behandlungen und Therapien sowie der Überwachung der öffentlichen Gesundheit. In dieser Studie wurde eine BioNanoPore-Technologie (BNP™ Middlebrook-Agar) untersucht, um M. tuberculosis in kürzerer Zeit als mit herkömmlichen Plattenzählmethoden nachzuweisen und zu quantifizieren. BNP™ Middlebrook ermöglichte den visuellen Nachweis von M. tuberculosis in aktiv wachsenden Kulturen und inokuliertem künstlichem Sputum innerhalb von 5 Tagen; auf Middlebrook 7H10-Agar waren jedoch keine Kolonien sichtbar. Bei Kulturen, die 19 Tage lang mit oder ohne künstlichem Sputum auf BNP™ Middlebrook inkubiert wurden, lag der M. tuberculosis-Gehalt bei 5,81–5,86 log10CFU/ml aus der Flüssigkultur und bei 6,39–6,50 log10CFU/ml im künstlichen Sputum; Die Zählungen für M. tuberculosis in Flüssigkultur lagen zwischen 5,70 und 5,85 log10CFU/ml auf Middlebrook 7H10. Alle Kolonien aus 19 Tage alten Kulturen, die aus den Medien BNP™ Middlebrook und Middlebrook 7H10 ausgewertet wurden, waren durch Echtzeit-PCR positiv für die Mycobacterium -Insertionssequenz (IS) 6110. Diese Studie zeigt, dass BNP™ Middlebrook M. tuberculosis schneller erkennen kann als Standard-Plattierungstechniken, und zwar in Gegenwart oder Abwesenheit einer simulierten biologischen Matrix (künstlicher Auswurf). Darüber hinaus stört der Farbentwicklungsschritt von BNP™ Middlebrook die Echtzeit-PCR-Erkennung von IS 6110 nicht. Diese Studie bietet eine vorläufige Einschätzung der potenziellen Verwendung von BNP™ Middlebrook für ein schnelleres Screening und eine schnellere Erkennung lebender M. tuberculosis im Hinblick auf die klinische Probenbewertung,
die Wirksamkeit therapeutischer Behandlungen/Impfstoffe oder die epidemiologische Überwachung.