Zeitschrift für mikrobielle und biochemische Technologie

Abstrakt

Überexpression eines Chitinasegens aus dem thermophilen Pilz Thermomyces lanuginosus in Saccharomyces cerevisiae und Charakterisierung der rekombinanten Chitinase

M. Prasad und P. Palanivelu

Ein Chitinasegen aus dem thermophilen Pilz Thermomyces lanuginosus ATCC 44008 wurde geklont und in Saccharomyces cerevisiae SEY 2101 überexprimiert. Die rekombinante Chitinase wurde als lösliches sekretiertes Protein hergestellt. Die Enzymaktivität erreichte am vierten Tag bei 30°C im Induktionsmedium ihr Maximum. Die überexprimierte Chitinase zeigte ihre optimale Aktivität bei einem pH-Wert von 6,5 und 60°C. Die rekombinante Chitinase zeichnete sich durch eine bemerkenswerte Thermostabilität aus, da sie nach 6 Stunden bei 50°C mehr als 60 % ihrer Enzymaktivität behielt. Die Molekularmasse der überexprimierten Chitinase betrug 42 kDa, gemessen per SDS-PAGE. Die kinetischen Parameter wie KM und Vmax des Enzyms betrugen 0,403 mM bzw. 8,74 mmol/min/mg Protein. Die Synthese der rekombinanten Chitinase wurde durch Glucose stark unterdrückt. Der eukaryotische Translationsinhibitor Cycloheximid im Induktionsmedium zeigte eine um 10 % höhere Aktivität, während 30 % der Aktivität durch Transkriptionsinhibitoren, nämlich 8-Azaguanin und 8-Hydroxychinolin, gehemmt wurden. Die überexprimierte rekombinante Chitinase könnte möglicherweise in der Pharmaindustrie zur Herstellung von Chitooligosacchariden Anwendung finden.