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Abstrakt
Optimierung des RAPD-PCR-Protokolls zum Screening von Jatropha Curcas und Gossypium Hirsutum, die in mit Metallen kontaminierten Böden angebaut werden
Narayanan Mathiyazhagan und Devarajan Natarajan
Die Optimierung des Protokolls für die zufällig amplifizierte polymorphe DNA-Polymerase-Kettenreaktion (RAPD-PCR) wurde durchgeführt, um zwei Pflanzen (Jatropha curcas und Gossypium hirsutum) zu untersuchen, die in mit Metallen kontaminierten Böden gewachsen waren. Zur DNA-Extraktion wurde eine CTAB-Methode eingesetzt, aber zur Beseitigung von RNA-Verunreinigungen wurde über Nacht eine RNase-Behandlung durchgeführt. Die isolierte DNA wurde für die RAPD-PCR-Amplifikation verwendet. Die optimalen Bedingungen für eine zuverlässige Amplifikation erfordern eine höhere Konzentration von MgCl2 (3 mM), Primer (2,5 μM), Taq-DNA-Polymerase (1 Einheit) und 3 μl Matrizen-DNA (Probe) sowie eine Annealing-Temperatur von 55 °C. Unter diesen Bedingungen wurden für beide Pflanzenarten reproduzierbare amplifizierte Produkte beobachtet.