Einzelzellbiologie

Abstrakt

Entwicklung effizienter Methoden für zellbasiertes Toxizitätsscreening durch vergleichende Protokollanalyse und -optimierung

Sepideh Abolpour Mofrad, Katharina Kuenzel, Oliver Friedrich und Daniel F. Gilbert

In der Zellbiologie im Allgemeinen und in zellbasierten Hochdurchsatz-Screening-Ansätzen im Besonderen – z. B. zur in vitro-basierten Toxizitätsbewertung – werden in der Literatur verschiedene Methoden oder Protokolle beschrieben. Wenn ein zellbasierter Screening-Test zur Toxizitätsbewertung oder zur Bewertung einer anderen biologischen Frage zum ersten Mal in einem Forschungslabor etabliert werden soll, muss der Forscher eine Reihe verschiedener Protokolle aus der Literatur auswählen und ein optimiertes Protokoll für den beabsichtigten Einsatz erstellen. Dies ist normalerweise erforderlich, da optimierte Protokolle, die nach vergleichender Protokollanalyse und -optimierung erstellt wurden, meist selten verfügbar sind. In einer anderen Studie, die wir als Vorzeigestudie bezeichnen, haben wir eine vergleichende Analyse von drei verschiedenen Protokollen zur neuronalen NT2-Zelldifferenzierung durchgeführt, die in der Literatur verfügbar sind. Aus diesem Vergleich haben wir eine verbesserte und optimierte Methode entwickelt, die eine neuronale NT2-Differenzierung in Monolayer-Kulturen mit hoher Ausbeute an NT2-N-Zellen ermöglicht und ein systematisches in vitro-basiertes Primärscreening auf Entwicklungstoxizitäten und Neurotoxizitäten in verschiedenen Reifungsstadien ermöglicht. Um zu verhindern, dass immer wieder dieselben Experimente in verschiedenen Laboren auf der ganzen Welt und zu verschiedenen Zeiten durchgeführt werden, schlagen wir in diesem Kommentar die Entwicklung fortschrittlicher und effizienter Methoden durch vergleichende Protokollanalyse und -optimierung zur Anwendung in zahlreichen Forschungsfeldern im Zusammenhang mit der Zell- und Einzelzellbiologie vor.