Gentechnologie

Abstrakt

Molekulare Erkennung und Expression von Azurin: Ein Anti-Krebs-Protein aus lokalen Isolaten von Pseudomonas-Arten

Aslam F, Farooq A, Qaiser H, Bajwa S, Saleem F und Naz S

Azurin wurde im Jahr 2000 als Krebsmedikament erkannt und spielt eine wichtige Rolle bei der Auslösung von Apoptose und Zytotoxizität. Azurin kann sich nach dem Eindringen in Tumorzellen in das Zytosol und das Kernmaterial integrieren und p53 (ein Tumorsuppressorprotein) stabilisieren, wodurch dessen Anstieg im Zellinneren erleichtert wird. Ein 447 bp langes, per PCR amplifiziertes Azurinfragment aus Pseudomonas aeruginosa wurde in den Klonierungsvektor pTG19-T geklont. Die DNA-Sequenz sagt ein Präprotein mit einem Signalpeptid aus 19 Aminosäuren voraus, gefolgt von einem reifen Azurinprotein mit 128 Aminosäuren. Das Azurin-Gen wurde in den Vektor pET22b geklont. Der rekombinante rpET22b (+)-Azu-Vektor wurde in BL21-Codon Plus (DE3)-Zellen geklont. Eine optimierte, hohe Expression des Azurin-Gens wurde bei einer 0,5 mM IPTG-Konzentration nach 6 Stunden bei 37 °C erreicht. Die Sequenzierung zeigt eine Sequenzhomologie von 99,8 % mit der berichteten Azurinsequenz. Eine stille Mutation, d. h. CCA zu CCG, wurde an der 17. Aminosäure nachgewiesen. Die resultierende Aminosäure (Prolin) bleibt jedoch dieselbe.