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Abstrakt
Mittel-/Hochdurchsatz-D-Aminosäureoxidase-Kolorimetrische Methode zur Bestimmung von D-Aminosäuren. Anwendung für Aminosäureracemasen
Armand Berneman, Marcelo Alves-Ferreira, Nicolas Coatnoan, Nathalie Chamond und Paola Minoprio
Der Nachweis und die Quantifizierung freier Aminosäuren in Proben erfordert noch immer aufwendige, leistungsstarke und normalerweise teure und manchmal zeitraubende Technologien wie Gaschromatographie, HPLC oder hochselektive und empfindliche Säulenschalttechniken. Hier haben wir uns vorgenommen, eine einfache, einstufige Mikrotiterplattenmethode zum Nachweis und/oder zur Quantifizierung der meisten D-Aminosäuren in Lösungen zu entwickeln, die auf dem Enzym D-Aminosäureoxidase und der Erzeugung stöchiometrischer Mengen Wasserstoffperoxid basiert. Die Einbeziehung von Meerrettichperoxidase und OPD ermöglicht die Bestimmung der D-Aminosäurekonzentration durch die Absorption der Reaktionsprodukte im Vergleich zu seriellen Verdünnungen äquimolarer Mengen von L/D-Aminosäurestandards. Die Methode lässt sich leicht für eine Analyse der Aminosäureracemaseaktivität mit mittlerem/hohem Durchsatz anpassen.