Zeitschrift für Karzinogenese und Mutagenese

Abstrakt

Die Expression von L-Plastin in HCT 116-Kolorektalzellen erhöht die Migration und ROS auf NADPH-Oxidase-abhängige Weise

Eilis Foran, Michael Freeley, Aideen Long

Ziel: L-Plastin ist ein wirkungsbündelndes Protein, das normalerweise in Zellen hämatopoetischen Ursprungs exprimiert wird, aber auch mit maligner Transformation in Zusammenhang steht. Eine abnorme Expression von L-Plastin korreliert mit dem Tumorstadium bei kolorektalen Karzinomen, und eine ektopische Expression von L-Plastin in Kolonkarzinom-Zelllinien erhöht die Proliferation und Migration. L-Plastin wird als Reaktion auf eine Reihe von Reizen induzierbar an Ser ^{5 phosphoryliert, aber die Rolle von phosphoryliertem L-Plastin in Kolonkarzinomzellen ist noch nicht charakterisiert. Ziel dieser Studie war es, die Wirkung der L-Plastin-Ser- 5} -Phosphorylierung auf die Proliferation und Migration von HCT 116-Kolonkarzinomzellen zu analysieren .

Methoden: Wildtyp-L-Plastin oder ein Ser ⁵ L-Plastin-Mutant, bei dem Serin durch ein nicht phosphorylierbares Alanin ersetzt wurde, wurde in HCT 116-Zellen exprimiert. Die Zellproliferation wurde durch Zellzählung und Cyclin-D-Aktivierung beurteilt. Die Zellmigration wurde mithilfe von Transwell-Migrationstests beurteilt.

Ergebnisse: Wir fanden heraus, dass Wildtyp-L-Plastin bei Expression in HCT 116-Zellen konstitutiv an Ser ⁵ phosphoryliert wurde und eine erhöhte Proliferationsrate dieser Zellen förderte. HCT 116-Zellen, die Wildtyp-L-Plastin stabil exprimieren, erhöhten auch die Migrationsfähigkeit dieser Zellen zusammen mit erhöhten Konzentrationen reaktiver Sauerstoffspezies. NADPH-Oxidasen sind die wichtigsten intrazellulären Quellen reaktiver Sauerstoffspezies und die Hemmung der NADPH-Oxidase-Aktivität mit dem pharmakologischen Hemmer DPI verringerte die Migration dieser Zellen. Interessanterweise förderte die Expression eines L-Plastin-Mutanten mit einem nicht phosphorylierbaren Alanin anstelle von Ser ⁵ keine erhöhte Zellproliferation, was darauf hindeutet, dass für diesen Prozess eine Phosphorylierung erforderlich ist. Im Gegensatz dazu waren Zellmigration und ROS-Produktion unabhängig vom Phosphorylierungsstatus von Ser ⁵ .

Schlussfolgerung: Diese Daten zeigen, dass die Expression von L-Plastin in HCT 116-Dickdarmkrebszellen die Migration in einer Weise erhöht, die von NADPH-Oxidase abhängig, aber unabhängig vom Ser ⁵ -Phosphorylierungsstatus ist.