Biologie und Medizin

Abstrakt

Isolierung einer neuen Population multipotenter Stammzellen aus der Epidermisschicht der menschlichen Haut

AB Balaji, Kaiser Jamil, G Maruthiram und CM Habibulla

Vorderhautproben wurden nach chirurgischer Exzision von Jungen unter 7 Jahren vom Deccan Medical College – Hyderabad in kalter Kochsalzlösung (40 °C) in sterilen Behältern entnommen. Diese Hautproben wurden in kleine Stücke geschnitten und über Nacht in trypsinisierter phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) inkubiert, um die Epidermis von der Dermis zu trennen. Die abgelöste Epidermisschicht wurde abgehoben und zur Herstellung der Zellsuspension verwendet. Die Lebensfähigkeit der Zellen betrug 88 % bei PI-Färbung. Etwa 50 μl der Zellsuspension wurden in Fläschchen (105 Zellen/pro Fläschchen) aliquotiert und mit 2 μl der Antikörper inkubiert. Es wurden verschiedene Biomarker von Stammzellen verwendet, wie CD34 – einer der Marker von Hautstammzellen, CD 49f & CD29 – gängige Stammzellmarker, CD45 Lymphozytenmarker, CD90 (Thy-1) Hautstammzellmarker und CD105 Endothelmarker sowie CD56 (NCAM) neuraler Adhäsionsmarker. Unter Verwendung dieser Zelloberflächenmarker von Stammzellen wurde eine Zytometrie auf einem FACS Calibur mit Sortierer (BD Biosciences) durchgeführt. Diese immunphänotypischen Marker drückten mit der Cellquest-Software die Eigenschaften der Stammzellen aus. FACS-Analysen ergaben unterschiedliche Profile von Stammzellen/Vorläuferzellen von mesenchymalen, hämatopoetischen und neuralen Vorläuferzellen. Diese ausgedrückten Profile wiesen darauf hin, dass ihr Vorläufer multipotent und/oder pluripotent sein könnte. Durch die Verwendung embryonaler Marker konnten wir eine Population von Stammzellen auswählen, um multipotente oder pluripotente Zellen zu erhalten, die die Fähigkeit haben könnten, Hautzellen für die Anwendung bei Verbrennungen, Wunden, tiefen Verbrennungen und nicht heilenden Wunden zu regenerieren. Abschließend präsentieren wir hier zum ersten Mal die Isolierung pluripotenter / multipotenter Hautstammzellen aus Biopsieproben menschlicher Vorhaut und ihre potenziellen Anwendungen für verschiedene Anwendungen.