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Abstrakt
Isolierung und Sequenzierung der an der Zytoskelettbildung in Phytophthora cinnamomi beteiligten Gene Actin1, Actin2 und Tubulin1
Ivone M Martins, M Carmen López, Angél Dominguez und Altino Choupina
Oomyceten der Gattung Phytophthora sind pilzartige Pflanzenpathogene, die verheerende Auswirkungen auf die Landwirtschaft und natürliche Ökosysteme haben. In der Region Nordeste Transmontano (Nordostportugal) ist der Kastanienanbau Castanea sativa äußerst wichtig. Die größten Produktivitäts- und Ertragseinbußen treten aufgrund der Tintenkrankheit auf, die durch Phytophthora cinnamomi verursacht wird, eine der am weitesten verbreiteten Phytophthora- Arten mit fast 1000 Wirtsarten. Das Wissen über die für die Pathogenität verantwortlichen molekularen Mechanismen ist ein wichtiges Instrument zur Bekämpfung der damit verbundenen Krankheiten dieses Pathogens. Vollständige offene Leserahmen (ORFs) der Gene act1, act2 und tub1, die an der Bildung des Zytoskeletts in P. cinnamomi beteiligt sind, wurden durch hocheffiziente thermische asymmetrische verschachtelte (HE-TAIL) Polymerase-Kettenreaktion (PCR) erstellt. Das Gen act1 umfasst einen 1128 bp langen ORF, der ein abgeleitetes Protein mit 375 Aminosäuren (aa) und 41.972 kDa kodiert. Der ORF von act2 umfasst 1083 bp und kodiert ein abgeleitetes Protein mit 360 aa und 40.237 kDa. tub1 hat eine Gesamtlänge von 2263 bp und kodiert ein 453 aa großes Protein mit einem Molekulargewicht von 49,911 kDa. Bioinformatische Analysen zeigen, dass Actin1 ortholog zu den Act1-Genen von Phytophthora infestans, Phytophthora megasperma und Phytophthora melonis ist; Actin2 ist ortholog zu den Act2-Genen von P. infestans, Phytophthora brassicae, P. melonis und Pythium splendens und Tubulin1 weist die höchste Orthologie zu den α -Tubulin-Genen von P. infestans und P. capsici auf . Die analysierte 3D-Struktur der drei mutmaßlichen Proteine ergab eine räumliche Konformation, die den für orthologe Proteine beschriebenen, durch Röntgenbeugung erhaltenen sehr ähnlich ist.