Zeitschrift für biomolekulare Forschung und Therapeutik

Abstrakt

Immunchemische Charakterisierung der spezifischen Sequenz des URG7-Proteins

Ostuni A, Cuviello F, Salvia AM, D'Auria F, Statuto T, Di Nardoc E, Miglionico R, Carrettad V, Musto P und Bisaccia F

URG7 ist ein anti-apoptotisches Protein, das aus 99 Aminosäureresten besteht, die während der HBV-Infektion durch Antigen x hochreguliert werden. Die ersten 74 Aminosäuren sind identisch mit denen des Multidrug Resistance Protein 6 (MRP6), während die Aminosäurereste 75 bis 99 spezifisch für das URG7-Protein sind. Immunoinformatik-Tools und Sekundärstrukturanalysen wurden eingesetzt, um die antigenen Eigenschaften dieser URG7-Sequenz zu identifizieren. Das Peptid 75-99 wurde mit der Festphasenmethode synthetisiert, strukturell durch CD-Spektroskopie charakterisiert und an einen Proteinträger konjugiert. Weiße Neuseeland-Kaninchen wurden immunisiert und Seren wurden mittels ELISA und Western-Blot-Analyse auf anti-peptidspezifische Antikörper getestet. Abschließend wurde ein ELISA-Test mit menschlichen Seren durchgeführt.

Mit dem 75-99-Peptid immunisierte Kaninchen produzieren Antikörper, die sowohl das 75-99-Peptid als auch das rekombinante URG7-Polypeptid erkennen. Darüber hinaus ermöglichten beide Antigene den Nachweis der Anti-URG7-Antikörper in Seren gesunder und HBV-infizierter Personen, wenn auch mit unterschiedlichen Unterscheidungsschwellenwerten. Unsere Daten legen nahe, dass ein Peptid-ELISA-Test gegen die spezifische Sequenz des URG7-Proteins mit guter Sensitivität und Spezifität den Nachweis von Anti-URG7-Antikörpern in Seren von HBV-infizierten Patienten ermöglicht.