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Abstrakt
Durch Immunocapture Loop vermittelte isotherme Amplifikation zur schnellen Erkennung des Tomato Yellow Leaf Curl Virus (TYLCV) ohne DNA-Extraktion
Mohammad Amin Almasi, Seyedmohammad Hosseyni Dehabadi und Zahra Eftekhari
Um den Zeitaufwand für einige diagnostische Tests, darunter Polymerase-Kettenreaktion (PCR), Loop-vermittelte isotherme Amplifikation (LAMP; hauptsächlich aufgrund des DNA-Extraktionsschritts) und DAS-ELISA, auf ein Minimum zu reduzieren, wurden ein innovatives Immunocapture-LAMP- (IC-LAMP) und Immunocapture-PCR-Protokoll (IC-PCR) auf der Grundlage des Genoms des Tomato Yellow Leaf Curl Virus (TYLCV) verwendet und optimiert. Obwohl DAS-ELISA-, IC-PCR- und IC-LAMP-Tests erfolgreich positive infizierte Pflanzenproben erkennen konnten, war der letzte Test in Bezug auf Zeit, Sicherheit, Empfindlichkeit, Kosten, fehlende Notwendigkeit einer DNA-Extraktion und Einfachheit insgesamt überlegen. Das Hydroxynaphtholblau konnte in einem geschlossenen Röhrchenansatz einen lang anhaltenden, stabilen Farbwechsel und eine lange Helligkeit erzeugen, um das Risiko einer Kreuzkontamination zu vermeiden. Da IC-LAMP insgesamt empfindlich, kostengünstig und relativ benutzerfreundlich ist und außerdem genauere Ergebnisse als frühere Diagnoseverfahren liefern kann, schlagen wir diesen Test dementsprechend als äußerst zuverlässiges alternatives Viruserkennungssystem für die Erkennung von TYLCV und wahrscheinlich auch anderen virusbasierten Krankheiten vor.