Zeitschrift für mikrobielle und biochemische Technologie

Abstrakt

Expression und Reinigung von SAK-fusioniertem humanem Interferon Alpha in Escherichia coli

Shardul Salunkhe, Bhaskarjyoti Prasad, Ketaki Sabnis-Prasad, Anjali Apte-Deshpande und Sriram Padmanabhan

Es wird eine Methode zur verbesserten Rückfaltung und Reinigung von aus E. coli stammendem humanem Interferon -? (rhIFN ?2b) aus Einschlusskörpern als Staphylokinase (SAK)-Fusionsprotein beschrieben. Ein solches Fusionsprotein benötigte zur Expression keine Ergänzung seltener Codons und erwies sich bei 37 °C als stabil. Die optimalen Bedingungen für die Rückfaltung umfassten die Verwendung eines milden Denaturierungsmittels ohne die Notwendigkeit anderer Mittel zur Verhinderung der Aggregation. Das SAKrhIFN ?2b-Fusionsprotein wurde erfolgreich in zwei Reinigungsschritten gereinigt und mit Enterokinase in zwei Fragmente, nämlich SAK und IFN, gespalten. Beide Proteine ​​erwiesen sich als biologisch aktiv und zeigten eine ordnungsgemäße Faltung beider Fusionspartner. Das gespaltene IFN zeigte eine ähnliche Retentionszeit auf RP-HPLC wie das aus Bakterien stammende unmarkierte gereinigte IFN sowie ein ähnliches Molekulargewicht auf dem Agilent 2100 Bioanalyzer, was auf die ordnungsgemäße Verarbeitung des IFN nach der Enterokinase-Spaltung hinweist. Die Expressionsniveaus von SAK-IFN waren doppelt so hoch wie die unter ähnlichen Versuchsbedingungen bei unmarkiertem IFN beobachteten.