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Abstrakt
Expression und Produktion polyklonaler Antikörper gegen das rekombinante Hüllprotein des Erdnussknospennekrosevirus
Sivaprasad Y, Bhaskara Reddy BV, Sujitha A und Sai Gopal DVR
Eine In-vitro-Genexpressionsstrategie wurde zur Herstellung eines polyklonalen Antiserums gegen das Hüllprotein (CP) des Erdnussknospennekrosevirus (PBNV) verwendet. Das GBNV-CP-Gen aus dem Erdnussisolat wurde in den pQE-30UA-Expressionsvektor geklont und in Escherichia coli-Zellen (M15) transformiert. Die Expression des CP-Gens von GBNV wurde in vitro induziert und das rekombinante Protein (~34 KDa) wurde gereinigt und zur Immunisierung von Kaninchen verwendet, um das GBNV-spezifische polyklonale Antiserum herzustellen. Das Antiserum hatte einen Titer von 1:5000 in einem indirekten Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) und reagierte spezifisch im Western Blot. Das resultierende Antiserum wurde zur Entwicklung eines Immunocapture-Reverse-Transkriptions-Polymerase-Kettenreaktionstests (IC-RT-PCR) verwendet und seine Empfindlichkeitsniveaus mit ELISA zum Nachweis von GBNV-Isolaten verglichen. Das rekombinante Antiserum konnte erfolgreich eine natürliche Infektion mit GBNV in wirtschaftlich wichtigen Nutzpflanzen und Unkrautwirten in Südindien nachweisen.