Zeitschrift für mikrobielle und biochemische Technologie

Abstrakt

Aspergillus fumigatus L-Aminosäureoxidase - Zweistufige Reinigung und Charakterisierung des Enzyms

Susmita Singh, Binod Kumar Gogoi und Rajib Lochan Bezbaruah

Aus Aspergillus fumigatus gewonnene L-Aminosäureoxidase (L-aao) wurde mittels Ionenaustauschchromatographie und Gelfiltrationschromatographie gereinigt. Die Ausbeute an L-aao bei der Ionenaustauschchromatographie betrug 24,40 %, während die Rückgewinnung von gereinigtem L-aao durch Gelfiltration 18,70 % des Rohenzyms betrug. Die Molekularmasse des gereinigten Enzyms wurde mittels SDS-PAGE auf 55 kDa und mittels Gelfiltration auf 93 kDa geschätzt. Das Enzym war bis 40 °C und über einen breiten pH-Bereich von 5,6–9,2 stabil. Das Enzym weist eine höhere Spezifität gegenüber hydrophoben aromatischen L-Aminosäuren, nämlich Tyrosin und Phenylalanin, auf. Die kinetischen Parameter Km und Vmax wurden mit 43,47 mM bzw. 0,0434 μmol/min/ml bestimmt. 10 mM Benzoesäure und EDTA hemmten das Enzym vollständig, während eine minimale Hemmung mit Glycin (29,56 %) und α-Naphthol (12,4 %) beobachtet wurde. Riboflavin, Natriumazid und 8-Hydroxychinolin hemmen das Enzym um bis zu 44,89 %, 49,63 % bzw. 70,07 %. MgSO4 bei 10-4 M und 10-3 M erhöhte die Enzymaktivität um das 1,72- bzw. 2,22-fache, während CuSO4 bei 10-3 M die Aktivität um das 1,65-fache erhöhte. Dies ist der erste Bericht über die Reinigung von L-aao aus Aspergillus fumigatus.