Erbliche Genetik: Aktuelle Forschung

Abstrakt

ELISAs zur Bestimmung von Ochratoxin A mittels monoklonalem Anti-Ochratoxin A-Antikörper oder F(ab')2-Fragment

Jawor Iwanow

Zusammenfassung:
Ochratoxinesind mögliche Karzinogene für den Menschen, und die Entwicklung eines sensitiven Immunassays zu ihrer Bestimmung in Lebensmitteln ist eine äußerst wichtige Aufgabe. Ziel dieser Studie war die Entwicklung sensitiver ELISAs auf der Basis monoklonaler Mäuse-Antikörper (mAb) gegen Ochratoxin A (OTA) oder dessen F(ab')2-Fragment. Der Mäuse-mAb wurde in vitro mithilfe von Gewebekulturtechniken hergestellt. Die Aktivität des erhaltenen Anti-OTA-mAb wurde gemessen. Das F(abʹ)2-Fragment des Anti-OTA-mAb wurde durch Pepsinhydrolyse des hergestellten mAb gewonnen. Unter Verwendung des erhaltenen F(ab')2-Fragments und des Anti-OTA-mAb wurde ein indirekter ELISA durchgeführt. Es wurde ein Peroxidase-markierter Sekundärantikörper verwendet. Die analytischen Eigenschaften des indirekten ELISA mit F(abʹ)2-Fragment wurden mit denen mit mAb verglichen. Der lineare Bereich von OTA im Phosphatpuffer beim Immunassay mit F(ab')2-Fragment lag zwischen 0,1 und 100 ng/ml. Der lineare Bereich des Immunassays mit dem gesamten Anti-OTA-mAb reichte von 0,1 bis 10 ng/ml. Die erhaltenen Ergebnisse wurden mit zertifizierten Mäuse-mAbs gegen Ochratoxin A verglichen. Der lineare Bereich mit dem zertifizierten mAb reichte von 1 bis 500 ng/ml. Die entwickelten ELISAs mit dem erhaltenen F(abʹ)2-Fragment oder dem produzierten Anti-OTA-mAb bieten die Möglichkeit, niedrige OTA-Konzentrationen zu messen.