Zeitschrift für mikrobielle und biochemische Technologie

Abstrakt

Diabetes Typ II im Zusammenhang mit Anämie

Luljeta Hetemi

Einführung:

Der Zweck dieser Studie bestand in der Nachsorge von Patienten mit Diabetes Typ II durch Tests auf Derivate von Glykohämoglobin (HbA1c). Die Bedeutung der HPLC-Methode bei HbA1c-Tests für Diagnose, Überwachung, Nachsorge und Zugang zur Therapie bei Diabetes Typ II wurde ebenfalls untersucht. Außerdem wurden Ergebnisse zu Diabetes, Prädiabetes, Insulingabe beim Patienten, Monotherapie erzielt, aber auch abnorme HgB-Formen bei Diabetikern wie Hämoglobinopathien festgestellt. Im Laufe der Forschung stellten wir fest, dass ein HbA1c-Test mit HPLC bei einigen Pathologien die Diagnose erleichtert, bei anderen Pathologien jedoch sowohl präventiv als auch diagnostisch wirkt. Die Forschung im Olive Medical & Laboratory Diagnostic Center dauerte über ein Jahr.

Verfahren:

HPLC (Hochleistungsflüssigkeitschromatographie) G8 Tosoh, exklusiver Vertriebspartner: Keis Group Pharmaceutical Kosovo. Zum ersten Mal in unserem Land haben wir HbA1c mit HPLC durchgeführt. Der G8-Analysator ist die nächste Generation der führenden HPLC-Testsysteme von Tosoh für schnelle und genaue HbA1c-Ergebnisse. Der Analysator verdünnt die Vollblutprobe mit Hämolyse- und Waschlösung und injiziert dann ein kleines Volumen der behandelten Probe auf die TSKgel Glyco HSi Variant Column. Die Trennung wird durch Ausnutzung von Unterschieden in den ionischen Wechselwirkungen zwischen der Kationenaustauschgruppe auf der Säulenharzoberfläche und den Hämoglobinkomponenten in einer Stufengradientelution erreicht. Die Hämoglobinfraktionen (bezeichnet als A1a, A1b, F, LA1c, SA1c, A0 und H-V0, H-V1, H-V2) werden anschließend durch eine schrittweise Elution mit Elutionspuffern HSi Variante 1, 2 und 3, die spezifische Salz- und pH-Konzentrationen aufweisen, vom Säulenmaterial entfernt. Die getrennten Hämoglobinkomponenten passieren die Durchflusszelle des LED-Photometers, wo Änderungen der Absorption bei 415 nm gemessen werden. Die G8-Software integriert und reduziert die Rohdaten und berechnet dann die relativen Prozentsätze jeder Hämoglobinfraktion. Der Ausdruck besteht aus den numerischen Ergebnissen und dem Chromatogramm. Dies stellt die Änderungen der Absorption gegenüber der Retentionszeit für jede Spitzenfraktion dar. Eine Analyse erfordert nur 1,6 Minuten. Die Studie wurde an 150 Patienten durchgeführt, davon waren 80 % Diabetiker Typ II, im Alter zwischen 40 und 65 Jahren, mit HbA1c-Werten zwischen 6,9 und 11 %, HbA1c zwischen 6,8 und 8, HbF über 1–8 % (in 48 % der Fälle war HbF positiv). Die Kontrollgruppe bestand aus Nichtdiabetikern, Patienten mit Verdacht auf Dyslipidämie und ohne Anzeichen von Typ-II-Diabetes, der Grund für die Tests war eine hohe oder mittelschwere Insulinresistenz, einige dieser Patienten litten am polyzystischen Ovarialsyndrom. Neben der absoluten Genauigkeit der HPLC-Methode beim Testen von HbA1c haben wir in dieser Studie bei Patienten mit Typ-II-Diabetes positive HbF-Werte festgestellt, was uns zu Anämie führt. Als Ursache dieser Anämie wird eine Nierenfunktionsstörung angenommen, z. B. diabetische Nephropathie – eine Komplikation von Typ-II-Diabetes. Ein noch unklarer Mechanismus zwischen angeborenem abnormalem HbF und Typ-II-Diabetes bleibt jedoch unberücksichtigt, da wir nicht alle Patienten auf Hb-Elektrophorese testen konnten. Aus diesen Laborbefunden geht hervor, dass HbF zu einer erhöhten Pathologie führt: Zusätzlich zu dieser angeborenen Form wurde ein erhöhter Wert auch in Fällen von perniziöser Anämie, hämolytischer Anämie, Thalassämie, Thyreotoxikose, tiefer Venenthrombose usw. festgestellt. LA1c, die labile Form von Glykohämorrhagia, kann bei Vorhandensein von carbamyliertem Hämoglobin (Harnstoff, Patienten mit Nierenerkrankungen) und acetyliertem Hämoglobin (Alkoholmissbrauch, Lebererkrankungen usw.) erhöht sein, was natürlich zu einem Anstieg des Blutzuckerspiegels führt.

 Bei hohem Blutzuckerspiegel haften Glukosemoleküle an roten Blutkörperchen. Je länger die Hyperglykämie anhält, desto stärker bindet sich die Glukose an Hämoglobin und desto höher ist das glykosylierte Hämoglobin. In dieser Studie fanden wir also bei etwa 35 % der Fälle mit positivem LA1c-Wert bereits eine diabetische Nephropathie, die durch eine positive Mikroalbuminurie und einen nephrologischen Arztbericht bestätigt wurde. Abnorme Formen von HbF-Werten in unserem Land, und in diesen 150 Fällen gab es keine anderen abnormalen Formen von Hb, also fanden wir andererseits eine Korrelation zwischen HbF-positiv und leicht oder mäßig erhöhtem Homocystein im Serum oder Hyperhomocysteinämie und 10 % von ihnen waren positiv für MTHFR-Mutation (etwa 15 % dieser Patienten, die die Möglichkeit hatten, getestet zu werden, ihre Laborergebnisse waren Homocystein-Serumwerte von 15-17, Referenzbereich für Erwachsene 5-15 μmol/L, Methode Immunoassay-Imulite-2000-Analysatoren für die quantitative Bestimmung von L-Homocystein in menschlichem Serum (Siemens), und andere anamnestische Daten dieser Fälle waren teilweise mit klinischen Anzeichen wie Beinödemen und Beinschmerzen verbunden, so dass, wie wir wissen, Hyperhomocystein ein Indikator für Herz-Kreislauf-Erkrankungen, Koronarerkrankungen, frühe Arteriosklerose, arterielle Thromboembolien ist, und dieses Risiko besteht bei Hypercholesterinämie, auch bei Homocystinurie als genetischer Defekt.

Ergebnisse:

Gesamthomocystein (tHcy) hat sich als wichtiger Risikofaktor bei der Beurteilung von Herz-Kreislauf-Erkrankungen herausgestellt. tHcy, eine Thiol-haltige Aminosäure, wird durch die intrazelluläre Demethylierung von Methionin produziert. Hcy dient dabei als Pool, der später zur Wiederaufbereitung von entweder Methionin durch die Wirkung des folatabhängigen Enzyms Methioninsynthase oder von Cystein über den B6-abhängigen Transsulfurierungsweg genutzt werden kann. Folat- und B6-abhängig ist ein weiterer Grund für Anämie in Verbindung mit Diabetes Typ 2, da ein positiver HBF-Typ vorliegt, der uns zu immer mehr Tests veranlasste. Diese veranlassten uns zu einer Folgekonsultation mit einem Gefäßchirurgen, der MTHFR mit 2 Mutationen und andere Hämostasetests benötigte. Die MTHFR-Mutationsergebnisse stammen vom Synlab-Labor in Deutschland. Die MTHFR-Mutation c677T war in 11 % dieser Fälle mutantenpositiv.

Abschluss:

Wir kamen zu dem Schluss, dass HPLC ohne Bedenken als Goldstandard-Diagnosemethode bezeichnet werden kann, da sie sich als die beste Methode erwiesen hat. 20 % unserer Patienten mit HbA1c-Werten zwischen 6 und 6,4 % hatten ein Risiko für Prädiabetes, etwa 10 % unserer Patienten hatten HbA1c-Werte über 6,5 %, wurden zum ersten Mal getestet und gelten als Diabetiker, etwa 25 % hatten eine angemessene Kontrolle mit Werten von 6,6 bis 7 %, und eine unzureichende Kontrolle gemäß ADA (American Diabetic Association Criteria) mit HbA1c-Werten von 7 bis 8 %, also etwa 45 % von ihnen. Basierend auf den HBF- und HbA1c-Befunden kann derselbe Diabetiker mit HPLC eine frühe Diagnose für Diabeteskomplikationen wie Nierenschäden, Leberschäden, Anämie, frühe Arteriosklerose, Thromboembolie, ICV-Risiko usw. erhalten.