Zeitschrift für Bakteriologie und Parasitologie

Abstrakt

Entwicklung einer sensitiven Nested Real-time PCR zur Diagnose akuter und chronischer Phasen der Toxoplasmose im Mäusemodell

Parisa Mousavi, Hossein Mirhendi, Hossein Keshavarz Valian, Saeedeh Shojaee, Shirzad Fallahi, Armin Farhang, Mohammad-Ali Mohaghegh und Rasool Jafari

Toxoplasma gondii ist ein intrazellulärer Parasit, der eine Vielzahl klinischer Erscheinungen verursacht. Akute und chronische Phasen der Toxoplasmose werden als das Vorhandensein von aktiv proliferierenden Tachyzoiten in den kernhaltigen Zellen von Säugetierwirten wie dem Menschen angesehen, die sich über das Blut in andere Teile des Körpers ausbreiten und anschließend Gewebezysten bilden. Ziel der vorliegenden Studie war es, den diagnostischen Wert der verschachtelten Echtzeit-Polymerase-Kettenreaktion (PCR) für die akuten und chronischen Phasen der Toxoplasmose bei Labormäusen im Vergleich zur herkömmlichen Echtzeit-PCR zu bewerten. Um eine akute Toxoplasmose auszulösen, wurden 103 Tachyzoiten des Stamms Toxoplasma gondii RH 25 BALB/c-Mäusen intraperitoneal inokuliert. Um eine chronische Toxoplasmose auszulösen, wurden die Mäuse subkutan mit dem Parasiten infiziert und dann vom ersten bis zum 14. Tag nach der Injektion mit Sulfadiazin behandelt. Genomische DNA wurde aus Blut und Gehirngewebe extrahiert. Es wurde eine Echtzeit- und verschachtelte Echtzeit-PCR mit Fokus auf das 529 bp wiederholte Element (RE) durchgeführt. Alle Mäuse mit akuter Infektion waren bei verschachtelter Echtzeit-PCR positiv für Toxoplasma gondii und 21 waren bei Echtzeit-PCR positiv. In der chronischen Phase waren alle Blutproben bei Echtzeit-PCR negativ und drei waren bei verschachtelter Echtzeit-PCR positiv. Von den 25 Gehirnproben waren jedoch 28 %, 52 % bzw. 72 % bei den mikroskopischen Methoden, der Echtzeit-PCR und der verschachtelten Echtzeit-PCR positiv. Die Ergebnisse der vorliegenden Studie zeigten, dass die molekularen Methoden eine hohe Sensitivität für die Diagnose einer akuten Toxoplasmose aufweisen. In der chronischen Phase ist eine Blutprobe nicht zum Nachweis der Infektion geeignet und stattdessen können andere Gewebeproben verwendet werden. Darüber hinaus weist die verschachtelte Echtzeit-PCR im Vergleich zur herkömmlichen Echtzeit-PCR eine sogar noch höhere Sensitivität auf.