Zeitschrift für Pflanzenpathologie und Mikrobiologie

Abstrakt

Entwicklung eines kolorimetrischen Loop-Mediated Isothermal Amplification Assays zur schnellen Erkennung des Tomato Yellow Leaf Curl Virus

Mohammad Amin Almasi, Mehdi Aghapour Ojaghkandi, Ahmad Hemmatabadi, Fatah Hamidi und Saeedeh Aghaei

Der Loop-mediated isothermal amplification (LAMP)-Test ist eine neuartige Technik zur Amplifikation von DNA bei konstanter Temperatur mit hoher Spezifität, Empfindlichkeit, Schnelligkeit und Effizienz. Wir haben zum ersten Mal ein Schnellnachweisprotokoll angewendet, das kolorimetrische Loop-mediated isothermal amplification zur Erkennung des Tomato Yellow Leaf Curl Virus verwendet. In dieser Hinsicht wurden alle vier LAMP-Primer (d. h. F3, B3, FIP und BIP) zusammen mit PCR-Primern (F und R) auf der Grundlage des SF-Gens der DNA-Sequenzen von TYLCV entwickelt. Obwohl DAS-ELISA-, PCR- und LAMP-Tests positiv infizierte Proben erfolgreich erkennen konnten, war der letzte Test in Anbetracht von Zeit, Sicherheit, Empfindlichkeit, Kosten und Einfachheit insgesamt überlegen. Unter den fünf verschiedenen visuellen Farbstoffen zur genauen Erkennung von LAMP-Produkten konnten sowohl Hydroxynaphtholblau als auch GeneFinderTM in einem engen Röhrchenansatz eine lang anhaltende, stabile Farbänderung und Helligkeit erzeugen, um das Risiko einer Kreuzkontamination zu vermeiden, und wurden letztendlich als die besten Schlussfolgerungen gezogen. Insgesamt wiesen alle Ergebnisse darauf hin, dass LAMP ein interessantes, neues und praktisches Testformat für die schnelle,
sensible, kostengünstige und relativ benutzerfreundliche Diagnose des Tomato Yellow Leaf Curl Virus bietet und daher eine Alternative zu PCR-basierten Tests darstellt.