Zeitschrift für Bioäquivalenz und Bioverfügbarkeit

Abstrakt

Bestimmung von Fingolimod im Vollblut mittels LC-MS/MS: Anwendung in der Bioäquivalenzstudie

Tawfiq Arafate, Ahmed Abu-Awwad, Basil Arafat, Asaad Shahin, Hadil Alotaibi, Mona Bustami

Eine neue bioanalytische Flüssigchromatographie-Tandem-Massenspektrometrie-Methode wurde für die klinische Bestimmung von Fingolimodhydrochlorid im Vollblut entwickelt und validiert. Die Methode wurde in einer Bioäquivalenzstudie mit parallelem Open-Label-Design, randomisierter Einzeldosis und zwei Behandlungen an gesunden erwachsenen männlichen Probanden im Fastenzustand angewendet. Fingolimod mit markiertem internen Standard (IS; Fingolimod-D4) wurde durch Flüssig-Flüssig-Extraktion aus menschlichem Blut extrahiert und chromatographisch über eine Fortis UniverSil Cyano-Säule von der Matrix getrennt. Die etablierte Methode wurde über einen Kalibrierungsdynamikbereich von 12 - 1200 pg/ml für versetztes Blut validiert. In einem einzigen Zeitraum erhielt jeder der 42 gesunden Freiwilligen eine Einzeldosis einer 0,5 mg Fingolimodhydrochlorid-Kapsel entweder des Test- oder des Referenzprodukts. Die pharmakokinetischen Parameter Cmax _, AUC0 _–t und Tmax _wurden für Fingolimod im Blut des Testprodukts berechnet und mit dem Referenzprodukt verglichen. Fingolimod und IS wurden durch einen positiven Multiple Reaction Monitoring (MRM)-Scanmodus bei einem Massenfilter von m/z 308,4 → 255,3 für Fingolimod und 312,4 → 259,3 für IS nachgewiesen. Alle Validierungsergebnisse lagen innerhalb der Akzeptanzkriterien gemäß der europäischen Leitlinie für bioanalytische Methoden. Die aktuellen Ergebnisse von AUC _0-72 , C _max und T _max für Gilenya ^® waren biovergleichbar mit entsprechenden Parametern, die aus dem Testprodukt abgeleitet wurden. Die validierte Methode wurde erfolgreich in einer Bioäquivalenzstudie angewendet, um Figolimod 0,5 mg Kapseln aus menschlichem Vollblut nach einem parallelen Periodendesign zu untersuchen.