Zeitschrift für Pflanzenpathologie und Mikrobiologie

Abstrakt

Nachweis des Hüllproteingens des Kartoffelblattrollvirus durch Reverse-Transkriptionsschleifen-vermittelte isotherme Amplifikation

Mohammad Amin Almasi, Hossein Jafary, Aboubakr Moradi, Neda Zand, Mehdi Aghapour Ojaghkandi und Saeedeh Aghaei

Der Loop-mediated isothermal amplification Assay amplifiziert DNA/RNA mit hoher Spezifität und Sensitivität. In dieser Studie beschreiben wir einen optimierten Reverse-Transkription-LAMP-Test zum Nachweis des Kartoffel-Blattrollvirus. Zunächst wurde ein DAS-ELISA-Test durchgeführt, um das Virus in einer Sammlung mit 40 verdächtigen Proben nachzuweisen. Zuletzt wurden zwei Proben als positive Proben erkannt. Anschließend wurden die positiven Proben mit RT-PCR- und RT-LAMP-Methoden verifiziert. Darüber hinaus zeigten die Ergebnisse, dass der RT-LAMP-Test im Vergleich zu RT-PCR 40-mal sensitiv und 4-mal schneller war. Der RT-LAMP-Test wurde im Wasserbad durchgeführt, entweder frei von Thermocycler-Maschinen oder hochentwickelten Laboreinrichtungen. Darüber hinaus wurden in der RT-LAMP-Reaktion die positiven Proben durch die Trübung nachgewiesen, die durch Magnesiumpyrophosphat erzeugt wurde. Interessanterweise
könnte die Anwendung von CaCl2 anstelle von MgSO4, das in der Reaktion Calciumpyrophosphat erzeugt, sowohl die Stabilität als auch die Konzentration der Trübung erheblich erhöhen. Folglich könnte es eine interessante Alternative zu MgSO4 sein. Insgesamt kann der neu entwickelte RT-LAMP-Test eine sensible, spezifische und kostengünstige Methode zur Früherkennung des Kartoffel-Blattrollvirus und auch anderer viraler Pflanzenpathogene sein.