Gentechnologie

Abstrakt

Nachweis von 5-Carboxylcytosin in der DNA von Säugetierzellen

Yihua Gao, Jian Li, Bin Chen, Qingjin Yang, Junjie Zhang, Lijian Zhang, Qionglin Huang, Xiaoxia Ye und Chun Cai

5-Carboxylcytosin (5caC) ist ein wichtiges Derivat der Cytosinmodifikation im DNA-Demethylierungspfad. Die genaue Quantifizierung von 5caC ist jedoch eine Herausforderung, insbesondere in Säugetiergewebe. Dieses Problem ist wahrscheinlich auf die Spurenmenge von 5caC in Säugetierzellen und die unzureichende Empfindlichkeit der vorhandenen Technologien zurückzuführen. Hier berichten wir über eine neuartige LC-MS/MS-Methode zur genauen Quantifizierung von 5caC in Säugetierzellen. Das 5caC-Standardreagenz wurde synthetisiert, die genomische DNA mit Ameisensäure hydrolysiert und die Zielverbindung 5caC mittels HILIC LC-MS/MS nachgewiesen. Die Ergebnisse zeigten, dass 5caC im Allgemeinen in Mäuseorganen und Krebsgeweben vorkommt. Der 5caC-Gehalt im Mäusehirn war höher als in Lunge und Leber und war in Dickdarmkrebsgewebe im Vergleich zum angrenzenden Gewebe deutlich verringert. Dieses Ergebnis legt nahe, dass 5caC wahrscheinlich mit der Tumorentstehung in Verbindung steht und eine dominierende Rolle bei der epigenetischen Kontrolle der neuronalen Funktion spielt.