Klinische und medizinische Biochemie

Abstrakt

Nachweis und molekulare Charakterisierung zirkulierender Tumorzellen (CTCs) bei Patienten mit metastasiertem Melanom: Eine mögliche Anwendung der Flüssigbiopsie

Suresh M Kumar

Melanomspezifischer Anti-NG2-Antikörper, konjugiert mit Eisenoxid-Nanopartikeln, der entwickelt wurde, um CTCs aus Melanom-Xenograft-Modellen und Blut von Patienten mit metastasiertem Melanom zu isolieren, zu erkennen und zu kultivieren. Der Anreicherungsprozess umfasst die Lyse von RBC aus Blutproben unter Verwendung von RBC-Lysepuffer und verbessert die Krebszellgewinnung durch immunomagnetische Markierung und Trennung. Die effiziente Zellerfassung wurde durch fluoreszenzmarkierte Krebszellen validiert, die in gesundes menschliches Blut gegeben wurden, und der klinische Nutzen wurde in Proben von Patienten mit metastasiertem Melanom nachgewiesen. Das Spike-Experiment ergab in vier Versuchsreihen eine Rückgewinnung von über 70 %. Ein Melanommodell mit spontaner Metastasierung ergab, dass die Anzahl der CTCs während der Tumorprogression zunahm und mit der Entwicklung von Lymph- und Lungenmetastasen in vivo korrelierte. CTCs wurden in Blutproben von 6 von 7 Patienten nachgewiesen, die metastasiertes Melanom enthielten. Die CTCs waren positiv für Melanom-spezifische molekulare Marker wie S100, HMB45, MelaA, MITF und die CTCs waren positiv für Anti-NG2-Q-dot- und pERK2-Q-dot-Färbung. Das BRAFV600e-Genexpressionsmuster ergab, dass die CTCs BRAFV600e ähnlich den Kontrollmelanomzellen exprimierten. Die Eisenoxid-Antikörper-Nanopartikel-Isolierungsmethode ist eine äußerst zuverlässige und kostengünstige Nachweismethode für CTCs von Patienten mit metastasiertem Melanom. CTC-Zellen können für weitere analytische Studien oder potenzielle Arzneimittelempfindlichkeitstests kultiviert werden.