Pharmaceutica Analytica Acta

Abstrakt

CTP: Phosphocholin-Cytidyltransferase Alpha (CCTα) siRNA induziert den Zelltod von Lungenkrebszellen

Rukia Marijani und Barack O. Abonyo

CTP: Cholin-Cytidylyltransferase (CCT) ist ein geschwindigkeitsbegrenzendes Enzym, das für die Synthese von Phosphatidylcholin (PC) über den CDP-Cholin-Stoffwechselweg erforderlich ist, der für die Zellproliferation entscheidend ist. Zellen, denen bedingt die CCT?-Aktivität fehlt, sterben durch Apoptose. Die Hemmung der CCT?-Expression oder -Aktivität in Krebszellen mithilfe aktueller molekularer Techniken würde einen hervorragenden, nicht toxischen Mechanismus zur Abtötung von Krebszellen bieten. Ziel dieser Studie war es, die Möglichkeit der Verwendung von CCT?-siRNA-Sequenzen als Mittel gegen Krebs zu untersuchen, indem ihre Fähigkeit untersucht wurde, den Tod von Lungenkrebszellen herbeizuführen. p53-positive A549- und negative H1299-Lungenepithelzelllinien wurden 24 Stunden lang mit verschiedenen Konzentrationen (0–800 nM) von CCT?-siRNA-Sequenzen (A, B und C) und verschlüsselter siRNA-Sequenz (siRNA S) als Kontrolle transfiziert. Hemmung von CCT? Die Expression durch verschiedene siRNA wurde durch Western-Blot-Analyse ermittelt. Ein Olympus-Mikroskop wurde verwendet, um die Auswirkungen des CCT?-Knockdowns auf Zellstruktur und -morphologie zu beobachten, während die Rolle von CCT?-siRNA bei Zelltoxizität und -überleben durch Cell Titer Blue (CTB)- und Lactose-Dehydrogenase (LDH)-Tests analysiert wurde. Alle CCT?-siRNA-Sequenzen hemmten die CCT?-Proteinexpression signifikant. Mit dem Mikroskop aufgenommene Bilder zeigten, dass unbehandelte und mit siRNA S behandelte Zellen intakt waren und sichtbare Kerne hatten, während mit CCT?-siRNA transfizierte Zellen geschrumpft waren und ihre Kerne dunkle körnige Strukturen ähnlich apoptotischen Körpern enthielten. Bei höheren CCT?-siRNA-Konzentrationen waren die Zellmembranen vollständig abgebaut und zeigten Anzeichen von Zelllyse. Der CTB-Test ergab, dass unbehandelte Zellen eine hohe Fluoreszenzintensität zeigten, was auf das Vorhandensein lebensfähigerer Zellen hindeutet, die mit steigender CCT?-siRNA-Konzentration abnahm. Der LDH-Test zeigte, dass mit CCT?-siRNA transfizierte Zellen höhere Absorptionsraten aufwiesen als unbehandelte, was tote Zellen widerspiegelt. Beide Tests zeigten, dass mit siRNA S behandelte Zellen ähnliche Ergebnisse zeigten wie unbehandelte Zellen, was darauf schließen lässt, dass der Zelltod spezifisch auf die Hemmung von CCTasiRNA zurückzuführen war. Darüber hinaus verbesserte die Zugabe von PC die Lebensfähigkeit der mit CCT?-siRNA behandelten Zellen nicht. Diese Ergebnisse zeigen, dass CCT?-siRNAs das CCT?-Protein zerstörten, was zum Zelltod führte, was darauf hindeutet, dass die Sequenzen als Mittel gegen Krebs nützlich sein könnten.