Zeitschrift für Bluterkrankungen und Transfusionen

Abstrakt

Kryokonservierung und Zählung menschlicher endothelialer Vorläufer- und Endothelzellen für klinische Studien

Bogoslovsky T, Wang D, Maric D, Scattergood-Keepper L, Spatz M, Auh S und Hallenbeck J

Hintergrund: Endothel-Progenitorzellen (EPC) sind Marker für Endothelverletzungen und können als Ersatzmarker für die Gefäßreparatur in interventionellen klinischen Studien dienen. Ziel dieser Studie war es, eine Methode zur Isolierung von mononukleären Zellen des peripheren Bluts (PBMC) und zur Zählung von EPC und reifen Endothelzellen (EC) aus dem peripheren Blut zu modifizieren und den Einfluss der Kryokonservierung auf die Lebensfähigkeit von PBMC und auf die Anzahl von EPC und EC zu bewerten. Patienten/Methoden: EPC und EC wurden bei gesunden Freiwilligen in frisch isolierten PBMC analysiert, die in CPT (Zellpräparationsröhrchen) gesammelt wurden, und in PBMC, die mit 1) Gibco RecoveryTM Cell Culture Freezing Medium, 2) speziellem Gefriermedium kryokonserviert wurden. Die Lebensfähigkeit von PBMC wurde mithilfe von DAPI getestet. EPC wurden für CD45-CD34+CD133+/-VEGFR2+/- und EC für CD45-CD146+CD34+/-VEGFR2+/- gegatet. Ergebnisse: Kryokonservierung für 7 Tage bei -80 °C verringerte die lebensfähigen PBMC von 94 ± 0,5 % (frisch) auf 84 ± 4 % (das benutzerdefinierte Medium) und auf 69 ± 8 % (Gibco-Medium), während Kryokonservierung bei -65 °C die Lebensfähigkeit auf 60 ± 6 % (p<0,001, das benutzerdefinierte Medium) und 49 ± 5 % (p<0,001, Gibco-Medium) verringerte. In frischen Proben wurden frühe EPC (CD45-CD34+CD133+VEGFR2+) mit 0,2 ± 0,06 %, späte EPC (CD45-CD146+CD34+VEGFR2+) mit 0,6 ± 0,1 % und reife EC (CD45-CD146+CD34-VEGFR2+) mit 0,8 ± 0,3 % der lebenden PBMC ermittelt. Kryokonservierung mit Gibco und dem speziellen Gefriermedium bei -80 °C für 7 Tage verringerte die Anzahl der EPC und EC, dieser Rückgang war jedoch nicht statistisch signifikant. Schlussfolgerungen: Unsere Daten zeigen, dass Kryokonservierung bei -80 °C für 7 Tage die Lebensfähigkeit von PBMC und die Anzahl der EC- und EPC-Untergruppen verringert, wenn auch nicht signifikant. Diese Methode bietet möglicherweise einen optimierten Ansatz zur Isolierung und kurzfristigen Kryokonservierung von EPC-Untergruppen und reifen EC, der für multizentrische Studien geeignet ist.