Zeitschrift für biomolekulare Forschung und Therapeutik

Abstrakt

Komplexe Acylierung von Angiotensin II durch N-Hydroxysulfosuccinimid-gebundene Biotinreagenzien

Qinfeng Liu, Andres Lam und Achyut Kathuria

N-Hydroxysulfosuccinimid-gebundene Biotine (SulfoNHS-Biotine) sind wasserlösliche Biotinmarkierungen, die üblicherweise verwendet werden, um einen Biotinrest durch schnelle N-Acylierung primärer Amine an Proteine ​​zu konjugieren. Neben der erwarteten N-Acylierung am N-Terminus von Ag-II wurden mittels LC-MS eine unerwartete O-Acylierung durch SulfoNHSbiotin am Tyrosin von Angiotensin II (Ag-II) und eine nicht charakterisierbare Acylierung an einer dritten Stelle identifiziert. Die N-Acylierung erfährt in 0,1 % Ameisensäure nur eine unvollständige Hydrolyse, nicht jedoch bei pH 7,2 und 8,0, während zwei unerwartete Acylierungen unter beiden Bedingungen hydrolysieren, ihre Hydrolyse in 0,1 % Ameisensäure jedoch viel schneller verlief. Die Behandlung mit Dithiothreitol katalysierte selektiv die Hydrolyse beider unerwarteter Acylierungen, nicht jedoch der N-Acylierung von Ag-II. Die maximale Ausbeute der O-Acylierung des Ag-II-Tyrosins betrug 99 % bei pH 7,2 und 95 % bei pH 8,0 im Vergleich zur N-Acylierung von Lysin bei Reaktion mit überschüssigem SulfoNHS-Biotin mit diesen Ausbeuten von 94 % bei pH 7,2 und 96 % bei pH 8,0. Die Acylierung der dritten nicht charakterisierten Stelle von Ag-II zeigte eine maximale Ausbeute von ungefähr 17 % bei pH 7,2, aber eine höhere Ausbeute (≥ 47 %) bei pH 8,0 innerhalb von 30 Minuten. Die unerwartete O-Acylierung des Ag-II-Tyrosins erfolgte innerhalb von 1 Minute bei pH 7,2 oder pH 8,0, genauso schnell wie die N-Acylierung, während die andere unerwartete Acylierung bei pH 8,0 mehr Zeit benötigte, um abgeschlossen zu werden.